电针对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及氧化抗氧化的影响

论文摘要

目的:研究电针对非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）肝细胞色素P450 2E1（cytochrome P450 2E1,CYP 2E1）表达及氧化抗氧化的影响。探讨针刺治疗NAFLD的机理。方法: SD大鼠33只随机分组,分为正常对照组﹙11只﹚和造模组﹙22只﹚。正常组饲以基础饲料,造模组给以高脂饲料喂养。8周后处死3只（正常对照组1只,造模组2只）,病理组织检查验证造模成功以后将造模组分为NAFLD模型组﹙10只﹚和电针治疗组﹙10只﹚,电针治疗组施以电针“治疗”。取“足三里”、“丰隆”、“三阴交”、“太冲”穴,电针参数为疏密波,频率2Hz,强度4mV,以下肢轻微抖动为宜。治疗期间,正常组饲以基础饲料,模型组和电针组继续饲以高脂饲料,实验12周末,3组大鼠禁食24h,称重,乙醚麻醉,经心脏穿刺采血,所采血液于清洁塑料离心管中静置后,在低温离心机上分离血清（3000 r/min,10 min）,置-20℃低温冰箱保存待测,检测血清游离脂肪酸（FFA）。处死动物,打开腹腔,然后迅速取出肝脏,称湿重,检测肝指数,每只均于肝左叶取材3块,分别用10%甲醛固定,常规石蜡包埋,用于病理切片;余下肝脏生理盐水漂洗,滤纸拭干,称取1 g,加入冰盐水10 ml,在冰水中匀浆。制成10%匀浆。3000 rpm 10 min离心取上清液,检测肝内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷胱甘肽（GSH）含量变化.HE染色切片观察肝组织病理形态的变化,免疫组化检测肝细胞色素CYP 2E1表达,免疫组化结果采用IPP5.1免疫组化分析软件,每张切片随机选取5个着色典型的视野,计算每个视野的具体累积光密度值（intergrated optical density,IOD）,取其均数作为该切片的着色强度,结果以x±s表示.统计学处理采用方差分析和q检验。结果:1.8周造模结束后,肝脏病理组织学检查:光镜下可见正常组大鼠肝细胞排列紧密成索状,仅个别细胞内有少量脂滴,造模组大鼠肝细胞胞浆内有大量脂肪空泡呈透明状,胞核被脂肪空泡挤到肝细胞边缘,病理组织学检查证明造模成功。2.12周末处死三组大鼠,结果显示:电针组与模型组比较,血清FFA水平、体重、肝指数明显降低﹙P﹤0.05﹚,肝TG、TC、MDA含量显著性降低（P<0.01）,肝SOD、GSH含量明显升高（P<0.01）。电针组血清FFA水平、体重、肝指数下降值高于正常组（P<0.05）,肝TG、TC、MDA值高于正常组（P<0.01）,肝SOD、GSH值低于正常组（P<0.01）.病理组织学观察,模型组的所有动物均出现中度至重度的肝细胞脂肪变性,大量肝细胞肿胀水肿,胞浆内的脂滴多为大泡型,偶有点状坏死,汇管区炎细胞侵润明显,腺泡3区的脂肪变较2、1区重,电针组大鼠非酒精性脂肪肝肝组织小叶结构恢复,肝细胞条索较清晰,肝细胞内仅见少量小的脂肪空泡,肝脂肪变性显著减轻（见图片）。CYP2E1免疫组化结果显示,正常组肝CYP2E1表达在中央静脉周围数个细胞层,未超过腺泡3区。模型组肝CYP2E1呈弥漫性表达,在中央静脉周围以腺泡2,3区为明显,延伸至1区。电针组肝CYP2E1表达在中央静脉周围以腺泡3区为明显,延伸至2区,1区未见到表达（见图片）。与模型组比较,电针组CYP2E1 IOD值显著降低,组间差别具有统计学意义（P<0.01）.与正常组比较,电针组CYP2E1 IOD值升高,组间差别具有统计学意义（P<0.01）.与正常组比较,模型组CYP2E1 IOD值显著升高,组间差别具有统计学意义（P<0.01）。结论:1.电针治疗对NAFLD大鼠确有疗效。2.电针治疗对NAFLD大鼠血FFA水平、体重、肝指数、肝MDA、TG、TC有明显的降低作用,对NAFLD大鼠肝GSH、SOD具有明显的升高作用。3.电针治疗可以显著抑制NAFLD大鼠肝CYP2E1表达,病理组织学检查证明电针组肝组织脂肪变性和炎性损伤得以明显改善。以上研究结果证实,电针治疗抑制肝CYP2E1的表达,减轻脂质过氧化反应而使大鼠非酒精性脂肪肝获得明显的疗效。虽然其机制还太清楚,但推测可能是电针治疗明显降低血清FFA浓度,使CYP2E1酶的活性显著降低,抑制肝CYP2E1的表达,减轻脂质过氧化反应,使肝脏的脂肪变程度和炎性损伤得以改善。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：电针对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1 表达及氧化抗氧化的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文