波动性葡萄糖加重人脐静脉内皮细胞内质网应激

论文摘要

目的观察不同浓度葡萄糖及波动性葡萄糖对体外培养后人脐静脉内皮细胞（HUVEC）内质网应激的影响及白藜芦醇（RES）对波动性葡萄糖致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的干预作用。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为六组:正常葡萄糖组（NG,葡萄糖浓度为5.6mmol/L）、低糖组（LG,葡萄糖浓度为2.8mmol/L）、高糖组（HG,葡萄糖浓度为30mmol/L）、HG与NG波动组（HNF,葡萄糖浓度为30mmol/L和5.6mmol/L,每24h交替培养）、HG与LG波动组（HLF,葡萄糖浓度为30mmol/L和2.8mmol/L,每24h交替培养）、HLF+白藜芦醇组(HLF+RES,RES浓度为10-4mol/L)。各组细胞每24h换DMEM培养液一次,HNF、HLF、HLF+RES组在前24h用30mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养,后24h用2.8mmol/L或5.6mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养。NG、LG、HG组人脐静脉内皮细胞采用RT-PCR分别检测细胞内的12、24、48h葡萄糖调解蛋白78（GRP78）、生长阻滞与DNA损伤可诱导基因153（CHOP/GADD153）mRNA的表达。采用RT-PCR和Western blot方法测定48h各组人脐静脉内皮细胞胞浆中GRP78、CHOP/GADD153 mRNA和蛋白质的表达。各组人脐静脉内皮细胞于48h采用MTT法测定对细胞增殖率的影响;Hoechst染色观察各组细胞凋亡的形态学变化;测定细胞浆中超氧化物歧化酶（SOD）的活力、总抗氧化能力（TAC）、丙二醛（MDA）的含量。结果1在12h HG、LG组GRP78 mRNA表达比NG组增加,随时间延长在24h、48h逐渐降低,而HG、LG组CHOP/GADD153 mRNA表达随时间延长较NG组增加。48h与NG组相比HG、LG、HNF组GRP78 mRNA的表达均降低（P＜0.01）。而HLF组减低为著,明显低于HG、LG和HNF组（P＜0.01）。与NG组相比,HG、LG、HNF组GRP78蛋白表达及CHOP/GADD153mRNA和蛋白表达在48h均增加（P＜0.01）。而HLF组升高最著,明显高于HG、LG和HNF组（P＜0.01）。HLF+RES组较HLF组明显升高GRP78 mRNA表达（P＜0.01）,并降低GRP78蛋白表达,及CHOP/GADD153mRNA和蛋白表达（P＜0.01）,但未恢复至NG组水平。2与NG组相比HG和LG组抑制人脐静脉内皮细胞增殖率（P＜0.01）,HLF组对细胞增殖率抑制最明显（P＜0.01）。Hoechst染色提示HNF和HLF组细胞凋亡较NG组明显。3与NG组比较,HG、LG、HNF和HLF组均使SOD活性明显降低、TAC含量减少及MDA的含量明显升高,HLF组改变为著（P＜0.01）。HLF+RES组与HLF组比较,SOD活性升高、TAC含量增加及MDA的含量降低,但是与NG组相比仍未达到正常水平。结论高糖和低糖均引起人脐静脉内皮细胞氧化和抗氧化系统失衡,导致内质网应激,波动性葡萄糖加重人脐静脉内皮细胞的内质网应激。白藜芦醇在一定程度上缓解波动性葡萄糖引起的内质网应激和凋亡蛋白CHOP/GADD153的高表达,对葡萄糖波动引起的人脐静脉内皮细胞的损伤具有保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 缩略语
• 致谢
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