COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的实验研究

论文摘要

目的:观察细胞凋亡对COPD模型大鼠骨骼肌萎缩影响及相关基因Bcl-2、Bax的表达。方法:100只健康Wistar大鼠随机分为模型组80只,对照组20只。模型组采用1-29天,31-60天熏香烟,第30天气管内注入猪胰蛋白酶（PEE）的方法建立COPD大鼠模型。对照组不熏香烟,在模型组气管内注入PEE的同一天采用同一术式气管内注入等量生理盐水。继续饲养至第90天,以低于对照组大鼠平均体重的90%作为判断发生营养不良的标准,将实验大鼠分为:对照组、COPD营养正常组和COPD营养不良组。取大鼠膈肌、趾长伸肌制备石蜡切片,分别采用TUNEL法测定膈肌、趾长伸肌石蜡切片细胞凋亡率和免疫组织化学法测定Bcl-2、Bax表达,Image-Pro Plus version 6.0图像系统测定免疫组化表达强度,所得数据经SPSS 13.0软件进行单因素方差分析、t检验及相关性分析。结果:1.COPD模型大鼠营养不良组膈肌、趾长伸肌的凋亡率均显著高于对照组（P＜0.01,P＜0.01）、COPD模型大鼠营养正常组（P＜0.01,P＜0.01）。三组大鼠膈肌凋亡率与趾长伸肌比较均无差异（P＞0.5）。2.对照组膈肌、趾长伸肌Bcl-2的表达均强于COPD模型大鼠营养正常组（P＜0.01,P＜0.01）、COPD模型大鼠营养不良组（P＜0.01,P＜0.01）;COPD模型大鼠营养不良组膈肌、趾长伸肌的Bax表达均强于COPD模型大鼠营养正常组（P＜0.01,P＜0.01）、对照组（P＜0.01,P＜0.01）。三组大鼠膈肌Bcl-2、Bax与趾长伸肌比较均无差异（P＞0.5）。结论:COPD模型大鼠存在明显骨骼肌凋率增加,细胞凋亡可能是COPD模型大鼠骨骼肌萎缩的重要机制。Bcl-2、Bax参与调节COPD模型大鼠骨骼肌凋亡。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验动物及分组
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 实验动物分组
• 1.1.3 实验动物编号
• 1.1.4 实验动物饲养
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要实验用溶液的配制
• 1.4.1 猪胰弹性蛋白酶生理盐水溶液
• 1.4.2 4%多聚甲醛
• 1.4.3 0.01M柠檬酸盐缓冲液
• 1.5 大鼠COPD模型建立
• 1.5.1 气管内注入猪胰弹性蛋白酶
• 1.5.2 被动吸烟方法
• 1.6 COPD模型组大鼠营养不良的判断
• 1.7 模型组成模后分组
• 1.8 处死动物的时间、方式、肺功能的测定及标本的处理
• 1.8.1 处死动物的时间
• 1.8.2 肺功能的测定
• 1.8.3 处死动物的方式
• 1.8.4 肌肉组织的处理
• 1.8.5 肺组织的处理
• 1.8.6 骨骼肌、肺组织石蜡切片的制作
• 1.9 肺组织病理学检查
• 1.10 骨骼肌组织病理学检测
• 1.11 骨骼肌细胞凋亡率测定
• 1.11.1 方法
• 1.11.2 结果观察和分析
• 1.12 Bcl-2蛋白表达检测
• 1.13 Bax蛋白表达检测
• 1.14 Bcl-2、Bax观察和分析
• 1.15 统计学分析
• 第二章 结果
• 2.1 模型评价
• 2.1.1.大鼠一般情况
• 2.1.2 大鼠肺组织、气道病理改变（见本章附图1）
• 2.1.3.肺功能
• 2.1.4 大鼠体重变化
• 2.2 趾长伸肌骨骼肌重量变化
• 2.3 骨骼肌病理变化（见本章附图2）
• 2.4 骨骼肌凋亡率测定
• 2.4.1 实验大鼠膈肌、趾长伸肌凋亡率（见本章附图3）
• 2.4.2 趾长伸肌凋亡率与体重相关性分析
• 2.4.3 趾长伸肌凋亡率与骨骼肌重量的相关性分析
• 2.5 Bcl-2、Bax表达
• 2.5.1 Bcl-2表达:（免疫组化图片见本章附图4）
• 2.5.2 Bax的表达:（免疫组化图片见本章附图5）
• 2.5.3 趾长伸肌凋亡率与Bcl-2、Bax相关性
• 附图
• 附图1
• 附图2
• 附图3
• 附图4
• 附图5
• 第三章 讨论
• 3.1 COPD模型制备及本实验建立COPD大鼠模型的评价
• 3.2 骨骼肌萎缩在COPD营养不良判定中的作用
• 3.3 细胞凋亡在COPD模型大鼠骨骼肌萎缩中的作用
• 3.4 Bcl-2家族蛋白对COPO骨骼肌细胞凋亡的调节作用
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附录 综述
• 致谢