本文主要研究内容
作者陈鑫,胡玥玥,徐鸿毅,王晓燕,邓锴（2019）在《重组人PLCζ蛋白在昆虫细胞/杆状病毒表达系统内的表达、纯化及活性测定》一文中研究指出：PLCζ是PLC家族的一种新型同工酶,在哺乳动物卵母细胞激活中起着极其重要的作用。近年来,体外大量表达和纯化有活性的PLCζ蛋白用于结构生物学研究一直未能获得成功。本研究首次在杆状病毒表达系统中表达和纯化重组人PLCζ蛋白,首先将人PLCζ基因克隆至pFastBac-HTA质粒构建重组载体,转化DH10Bac发生位点特异性转座,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid-PLCζ;在脂质体介导下将穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞产生重组病毒,扩增病毒感染Sf9昆虫细胞进行蛋白表达;利用Ni2+亲和柱及分子筛来纯化蛋白,并通过考马斯亮蓝染色、Western blotting及飞行时间质谱对蛋白进行鉴定,并进行酶活性测定。结果显示重组蛋白在Sf9昆虫细胞感染杆状病毒后72 h达到峰值并以分泌形式表达在细胞培养基中,Ni2+亲和柱及分子筛纯化后的重组蛋白经Western blotting及电离飞行时间质谱鉴定为PLCζ蛋白,酶活性可达326.8 U/mL。该实验结果为重组人PLCζ蛋白大规模生产和生物医学应用研究提供了可参考利用的技术。
Abstract
PLCζshi PLCjia zu de yi chong xin xing tong gong mei ,zai bu ru dong wu luan mu xi bao ji huo zhong qi zhao ji ji chong yao de zuo yong 。jin nian lai ,ti wai da liang biao da he chun hua you huo xing de PLCζdan bai yong yu jie gou sheng wu xue yan jiu yi zhi wei neng huo de cheng gong 。ben yan jiu shou ci zai gan zhuang bing du biao da ji tong zhong biao da he chun hua chong zu ren PLCζdan bai ,shou xian jiang ren PLCζji yin ke long zhi pFastBac-HTAzhi li gou jian chong zu zai ti ,zhuai hua DH10Bacfa sheng wei dian te yi xing zhuai zuo ,jing kang xing he lan bai ban shai shua ,huo de chong zu chuan suo zhi li Bacmid-PLCζ;zai zhi zhi ti jie dao xia jiang chuan suo zhi li zhuai ran Sf9kun chong xi bao chan sheng chong zu bing du ,kuo zeng bing du gan ran Sf9kun chong xi bao jin hang dan bai biao da ;li yong Ni2+qin he zhu ji fen zi shai lai chun hua dan bai ,bing tong guo kao ma si liang lan ran se 、Western blottingji fei hang shi jian zhi pu dui dan bai jin hang jian ding ,bing jin hang mei huo xing ce ding 。jie guo xian shi chong zu dan bai zai Sf9kun chong xi bao gan ran gan zhuang bing du hou 72 hda dao feng zhi bing yi fen bi xing shi biao da zai xi bao pei yang ji zhong ,Ni2+qin he zhu ji fen zi shai chun hua hou de chong zu dan bai jing Western blottingji dian li fei hang shi jian zhi pu jian ding wei PLCζdan bai ,mei huo xing ke da 326.8 U/mL。gai shi yan jie guo wei chong zu ren PLCζdan bai da gui mo sheng chan he sheng wu yi xue ying yong yan jiu di gong le ke can kao li yong de ji shu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生物工程学报的陈鑫,胡玥玥,徐鸿毅,王晓燕,邓锴，发表于刊物生物工程学报2019年06期论文，是一篇关于蛋白论文,昆虫细胞论文,杆状病毒表达系统论文,表达论文,纯化论文,鉴定论文,生物工程学报2019年06期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生物工程学报2019年06期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：蛋白论文; 昆虫细胞论文; 杆状病毒表达系统论文; 表达论文; 纯化论文; 鉴定论文; 生物工程学报2019年06期论文;