论文摘要
阿尔茨海默病是痴呆的常见病因,环境和遗传因素共同作用导致其发病。2009年两项大规模的全基因组关联性研究发现了CLU基因多态性与阿尔茨海默病关联,开启了除ApoE基因以外的研究之路。本研究应用分子流行病学的方法,通过在CLU全基因范围内选取标签SNPs,研究CLU基因多态性在汉族人群散发性阿尔茨海默病患者中的分布及其与发病的相关性,该多态性与轻度认知损害和认知功能的关系,以及血清clusterin水平与认知功能障碍的关系。第一部分CLU基因多态性与阿尔茨海默病的相关性研究目的：观察CLU基因多态性在散发性阿尔茨海默病患者中的分布特点,并探讨其与发病的相关性。材料与方法：病例对照研究,收集散发性阿尔茨海默病患者和认知正常者的临床资料,采用标准试剂盒提取研究对象外周血DNA。按其发病年龄,散发性阿尔茨海默病患者分为晚发型阿尔茨海默病组和早发型阿尔茨海默病组。按照年龄,认知正常者分为认知正常老年组和认知正常中年组。根据HapMap数据库中CHB（中国北京的汉族人）的SNPs数据,通过Haploview 4.2软件的Tagger程序在CLU全基因范围内选择标签SNPs。以LDR技术检测CLU标签SNPs的基因型,ARMS技术检测ApoE的基因型。应用基于最大似然（expectation maximization）算法的Haploview 4.2软件进行单体型推断。应用多因素Logistic回归分析发病的相关因素。结果：共入选了430例散发性阿尔茨海默病患者,其中,晚发型阿尔茨海默病组278例,早发型阿尔茨海默病组152例。462例认知正常者,其中,认知正常老年组358例,认知正常中年组104例。通过Tagger程序,选取了5个标签SNPs.CLU rs9331888位点多态性方面,散发性阿尔茨海默病组CG基因型的分布频率高于认知正常组（p=0.008）,早发型阿尔茨海默病组CG基因型的分布频率明显高于认知正常中年组（p=0.000）,G等位基因在早发型阿尔茨海默病组的频率高于认知正常中年组（p=0.011）;CLU rs9331942位点多态性方面,晚发型阿尔茨海默病组CT基因型的分布频率低于认知正常老年组（p=0.047）。单体型推断发现,rs2279590-rs11136000-rs9331888三个位点构成的G-C-C单体型在认知正常中年组频率明显高于早发型阿尔茨海默病组（p=0.019）rs3087554-rs9331888两个位点构成的A-G单体型在早发型阿尔茨海默病组频率高于认知正常中年组（p=0.020）,G-C单体型则低于认知正常中年组（p=0.033）。病例组ApoEε4（+）基因型的分布频率高于对照组（p=0.000）,ApoEε2（+）基因型的分布频率则低于对照组（p<0.01）。CLU其它3个标签SNPs各基因型和等位基因在病例组和对照组的分布无差异（p>0.05）。多因素Logistic回归分析显示,rs9331888 CG基因型是散发性阿尔茨海默病的独立危险因素,rs9331942 CT基因型是散发性阿尔茨海默病的保护因素。在平衡了“性别”、“年龄”、“文化程度”、“嗜好吸烟”、“嗜好饮酒”、“高血压”、“糖尿病”、“血脂异常”、‘’ApoEε4（+）基因型”和“ApoE￡2（+）基因型”后,rs9331888 CG基因型者发生阿尔茨海默病的风险是CC基因型者的2.010倍（0R=2.010,95% CI：1.356-2.977,p=0.001）,CG基因型者发生早发型阿尔茨海默病的风险是CC基因型的4.192倍（0R=4.192,95% CI：2.127-8.260,p=0.000）,GG基因型发生早发型阿尔茨海默病的风险是CC基因型的2.496倍（0R=2.496,95% CI：1.137-5.483,p=0.023）,G等位基因发生早发型阿尔茨海默病的风险是C等位基因的1.605倍（0R=1.605,95%CI：1.098-2.345,p=0.015）：rs9331942 CT基因型发生阿尔茨海默病的风险是CC基因型的0.584倍（OR=0.584,95% CI：0.350-0.973,p=0.039）。ApoE￡4（+）基因型者发生阿尔茨海默病的风险是ApoEε4（-）基因者的3.182倍（0R=3.182,95% CI：2.352-4.304,p=0.000）,ApoE￡2（+）基因型发生阿尔茨海默病的风险是ApoE￡2（-）基因型的0.41 5倍（OR=0.415,95% CI：0.263-0.655,p=0.000）。其它保护因素为“文化程度”,文化程度在初中及以上者发生阿尔茨海默病的风险是初中以下者的0.489倍（0R=0.489,95% CI：0.358-0.667,p=0.000）,发生晚发型阿尔茨海默病的风险是0.439倍（OR=0.439.95% CI：0.302-0.637,p=0.000）。危险因素为“吸烟”、“年龄”和“性别”。吸烟者发生阿尔茨海默病的风险是不吸烟者的1.503倍（0R=1.503,95%CI：1.033-2.188, p=0.033）,年龄与晚发型阿尔茨海默病成正相关（0R=1.110,95% CI：1.076-1.145,p=0.000）,男性发生早发型阿尔茨海默病的风险是女性的2.103倍（OR=2.103,95% CI：1.196-3.697,p=0.010）。CLU rs9331888基因型与早发型阿尔茨海默病的严重程度有一定的关联。结论：CLU rs9331888位点CG基因型是散发性阿尔茨海默病的独立危险因素,对早发型阿尔茨海默病的影响尤为突出,与其严重程度有一定的关联;CLUrs93319942位点CT基因型可能是散发性阿尔茨海默病的保护因素。ApoE￡4基因型是阿尔茨海默病的危险因素,ApoEε2基因型是保护因素。未发现CLU其他3个SNPs多态性与疾病的联系。第二部分CLU基因多态性与轻度认知损害及认知功能的相关性研究目的：探讨CLU 5个标签SNPs位点与轻度认知损害及认知功能的相关性。材料与方法：病例对照研究,收集轻度认知损害和认知正常者的临床资料。轻度认知损害符合Peterson诊断操作标准。采用标准试剂盒提取研究对象外周血DNA。以LDR技术检测CLU标签SNPs的基因型,ARMS技术检测ApoE的基因型。所有研究对象完成一套华山认知检测。认知功能的分析指标包括听觉词语学习测验、连线测验B、Stroop色词测验、Rey-0复杂图片模仿回忆、言语流畅性测验。根据CLU和ApoE基因多态性对不同基因型的认知功能进行协方差分析。结果：共入选轻度认知损害患者60例,认知正常者61例。CLU 5个SNPs基因型及等位基因频率在两组间无统计学差异（p>0.05）。CLU rs9331888 CG基因型在轻度认知损害组的频率高于认知正常组,有统计学差异趋势（p=0.173）。ApoEε4等位基因在轻度认知损害组的频率高于认知正常组分布频率,存在统计学差异（p=0.041）。校正年龄,文化程度影响后,在认知正常组,CLU rs9331888 CG型者听觉词语学习测验长回忆得分低于非CG者,有统计学差异（p=0.026）;ApoE￡4（+）者Stroop色词测验得分低于ε4（-）者,存在统计学差异（p=0.005）。在轻度认知障碍组,ApoEε4（+）者听觉词语学习测验长回忆得分低于ε4（-）,存在差异趋势（p=0.063）。结论：CLU rs9331888基因型可能与轻度认知损害有关。CLU和ApoE与认知功能可能有关。第三部分血清clusterin水平与认知功能障碍的相关性研究目的：探讨血清clusterin水平与认知障碍的相关性。材料与方法：收集认知正常者、轻度认知损害患者、阿尔茨海默病患者的临床资料。应用ELISA法测定血清clusterin水平,对三组研究对象血清clusterin的差异进行协方差分析。结果：共入选认知正常组30例,轻度认知损害组32例,阿尔茨海默病组24例。校正性别、年龄、高血压、血脂水平、血糖,心脏病等因素后,三组间血清clusterin水平无统计学差异。轻度认知障碍组的血清clusterin水平高于认知正常组,有统计学差异趋势（p=0.053）。快进展型阿尔茨海默病者血清clusterin水平与慢进展型阿尔茨海默病者无统计学差异。结论：血清clusterin水平可能在一定程度上与认知障碍有关联。
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