益骨颗粒治疗骨质疏松的药效及机理研究

论文摘要

第一章镇痛、抗炎作用目的:观察益骨颗粒的镇痛、抗炎作用。方法:镇痛实验小鼠随机分为5组。（1）空白对照组:蒸馏水;（2）益骨颗粒低剂量组:8g生药/kg;（3）益骨颗粒中剂量组:16g生药/kg;（4）益骨颗粒高剂量组:32g生药/kg;（5）骨松宝组:2g/kg。各组均灌胃给药1次,给药体积为0.2ml/10g。采用热板法和醋酸扭体法观察益骨颗粒的镇痛作用。抗炎作用采用三种方法——对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响、对巴豆油混合致炎剂所致小鼠耳廓肿胀的影响、对大鼠塑料环肉芽肿影响试验。前两个抗炎实验和镇痛实验一样分组给药,第三个实验的大鼠随机分为5组。（1）空白对照组:蒸馏水;（2）益骨颗粒低剂量组:4g生药/kg;（3）益骨颗粒中剂量组:8g生药/kg;（4）益骨颗粒高剂量组:16g生药/kg;（5）骨松宝组:1g/kg。造模后第10天开始灌胃给药,给药体积为1ml/100g,每天1次,连续给药14天。结果:益骨颗粒各剂量组在给药后各时间点痛阈值均高于空白对照组,尤其在给药后1h镇痛效果最明显。益骨颗粒中、高剂量组能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数,与空白对照组比较,有显著性差异（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增高（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒各个剂量组均能减轻小鼠耳廓肿胀度,与空白对照组相比,有显著性差异（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒各个剂量组肉芽肿净重,与空白对照组相比,均有显著性差异（P＜0.05,0.01）。结论:益骨颗粒有一定的镇痛、抗炎作用。第二章益骨颗粒对小鼠肠系膜微循环的影响目的:观察益骨颗粒对小鼠肠系膜微循环的影响。方法:昆明种小鼠随机分为5组。（1）空白对照组:蒸馏水;（2）骨松宝组（GSB）:2g/kg;（3）益骨颗粒低剂量组（BBG-L）:8g生药/kg;（4）益骨颗粒中剂量组（BBG-M）:16g生药/kg;（5）益骨颗粒高剂量组（BBG-H）:32g生药/kg。各组均灌胃,给药体积12ml/kg,连续给药3天。实验前禁食不禁水12小时,灌胃给药后,戊巴比妥钠40mg/kg,腹腔注射麻醉,背位固定,右下腹部剪毛,剪开约3cm切口,拉出一段肠袢,平铺于有机玻璃灌流小池上,大头针固定,30℃缓慢灌流,放大镜放大20倍观察微血管,固定视野,并用高压汞灯作为冷光源。分离股静脉供给药用,静脉注射10%高分子右旋糖酐6ml/kg,10分钟和30分钟分别观察并计录微循环障碍指标。观察固定区域内固定面积毛细血管与四周边界的交叉点数目、血流速度、毛细血管血流状态。结果:益骨颗粒三个剂量组毛细血管网交叉点数均增加;血液速度增快,与空白对照组相比,均有显著性差异（P＜0.05）;血流状态积分下降。结论:益骨颗粒有促进毛细血管开放作用,可以明显增加毛细血管血流速度和改善毛细血管内血流状态。第三章益骨颗粒对实验性骨质疏松大鼠模型的影响目的:观察益骨颗粒对实验性骨质疏松的影响。方法:雌性24周龄SD大鼠90只,随机分为6组。其中空白对照组大鼠不作处理,其余大鼠以3%戊巴比妥钠溶液1ml/kg的剂量腹腔注射麻醉,由背侧入,完整摘除双侧卵巢,止血缝合。空白对照组只切除少量脂肪组织。术后肌注青霉素生理盐水2万u/kg,连用3天。饲养一周后,将去卵巢大鼠随机分为5组,加上空白对照组总共6组:（1）空白对照组:给予等量的蒸馏水;（2）模型组:给予等量的蒸馏水;（3）益骨颗粒低剂量组（BBG-L）:给予益骨颗粒4g生药/kg;（4）益骨颗粒中剂量组（BBG-M）:给予益骨颗粒8g生药/kg;（5）益骨颗粒高剂量组（BBG-H）:给予益骨颗粒16g生药/kg;（6）阳性对照组（CEE3）:尼尔雌醇片以蒸馏水溶解后,灌胃给药1mg/kg。除阳性对照组每周灌胃一次,其余各组均每天灌胃一次（1ml/100g）。灌胃3个月后测定股骨骨密度（BMD）、血液生化指标、尿生化指标、降钙素（CT）、骨钙素（BGP）及雌二醇（E2）含量,并进行大鼠股骨干骺端松质骨扫描电镜观察。结果:模型组股骨骨密度显著低于空白对照组（P＜0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组骨密度值与模型组相比较有所提高,其中益骨颗粒中、高剂量组具有显著差异（P＜0.05,0.01）。模型组血钙、血磷含量显著低于空白对照组（P＜0.05）,碱性磷酸酶、羟脯氨酸含量显著高于空白对照组（P＜0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组血钙含量与模型组相比增加,碱性磷酸酶含量与模型组比较有所降低,其中中、高剂量组具有显著差异（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组血磷含量与模型组相比增加,羟脯氨酸含量与模型组相比降低,其中高剂量组具有显著差异（P＜0.05）。模型组尿钙、尿磷含量显著高于空白对照组（P＜0.05）。益骨颗粒低、中、高剂量组尿钙、尿磷含量与模型组相比有所降低,其中高剂量组具有显著差异（P＜0.05,0.01）。模型组降钙素（CT）及雌二醇（E2）含量显著低于空白对照组（P＜0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组含量与模型组相比增加,其中降钙素（CT）含量中、高剂量组与模型组具有显著差异（P＜0.05,0.01）,雌二醇（E2）含量低、中、高剂量组与模型组具有显著差异（P＜0.01）。模型组骨钙素（BGP）含量与空白对照组比较无差异。益骨颗粒低、中、高剂量组骨钙素（BGP）含量与模型组相比也无显著差异。模型组骨小梁排列稀疏,直径变细,骨髓腔较空旷。而益骨颗粒中、高剂量组对此有所改善。结论:益骨颗粒能够增加去卵巢大鼠的骨密度,改善松骨质微结构。益骨颗粒低、中、高剂量组碱性磷酸酶和骨钙素的含量低于模型组,能降低摘除卵巢后雌激素急剧下降所致的高骨转换率,有效延缓骨质疏松的发生。第四章益骨颗粒对成骨细胞的影响目的:运用中药血清药理学方法,观察益骨颗粒含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞（OB）体外增殖的影响及对成骨细胞分泌IL-6和TNF-α的影响。方法:雌性12月龄SD大鼠80只,随机分为生理盐水组、益骨颗粒低剂量（8g生药/kg）、中剂量（16g生药/kg）、高剂量（64g生药/kg）组,每日灌胃一次,连续12天,分别在灌胃后的1h、1.5h、2h采血,分离血清,用含不同浓度益骨颗粒的血清培养SD新生大鼠颅骨OB,MTT法检测细胞增殖情况。将SD大鼠30只,随机分为3组（空白组、益骨颗粒组和尼尔雌醇组）,每组10只,益骨颗粒（BBG）组按64g生药/kg灌胃给药,尼尔雌醇（CEE3）组按1mg/kg（尼尔雌醇片以蒸馏水溶解）灌胃给药,空白组给予同等体积的生理盐水。每日灌胃1次,连续12天,末次给药前禁食12 h,自由饮水,在末次给药后1.5 h乙醚麻醉,眼眶取血,3000r/min离心10 min,取上清。体外分离、培养成骨细胞,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞IL-6和TNF-α的水平。结果:末次灌胃后1.5 h采血组的吸收度（A）值明显高于各组其它时间（P＜0.05）,不同剂量各浓度的益骨颗粒含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用,其中以高剂量组的稀释比为20%的血清浓度最佳。结论:益骨颗粒含药血清对OB增殖具有明显的促进作用;益骨颗粒用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量8倍连续12天灌胃、末次灌胃后1.5 h采血,血清添加浓度以20%为宜。益骨颗粒组和尼尔雌醇组IL-6和TNF-α低于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。

论文目录

• 前言
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 益骨颗粒的镇痛、抗炎作用
• 一、镇痛作用
• 二、抗炎作用
• 第二章 益骨颗粒对小鼠肠系膜微循环的影响
• 1.实验材料
• 2.实验条件
• 3.实验方法
• 4.实验结果
• 5.讨论
• 第三章 益骨颗粒对实验性骨质疏松大鼠模型的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第四章 益骨颗粒对成骨细胞的影晌
• 一、益骨颗粒对成骨细胞增殖的影响
• 二、益骨颗粒对成骨细胞分泌IL-6和TNF-α的影响
• 全文总结
• 一、实验性骨质疏松模型
• 二、实验总结
• 参考文献
• 英文缩略词表
• 综述
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢