Melatonin对巨核细胞凋亡的影响及对铁负荷过重损害的保护作用研究

论文摘要

目的探讨Mel对巨核细胞凋亡的影响及其作用机制,并探讨铁负荷过重是否对巨核细胞有凋亡损害作用以及Mel是否具有抑制凋亡的保护作用。方法采用巨核细胞细胞株CHRF-288-11为研究对象。⑴通过去血清诱导凋亡,加或不加Mel共培养后,①进行24、48、72小时细胞计数、台盼兰拒染法测细胞存活率及XTT法检测细胞增殖情况;②用流式细胞仪分别以Annexin V、Caspase-3、JC-1三种方法测定各组细胞凋亡率;并与正常组和TPO组比较;③检测信号通路AKT、ERK1/2,了解其参与保护作用的机制。（2）通过台盼兰拒染法测活细胞比率和流式细胞仪法测定Annexin V、Caspase-3、JC-1,观察FeCl3负荷过重对CHRF细胞的凋亡损害作用。（3）通过台盼兰拒染法测活细胞比率和流式细胞仪法测定Annexin V、Caspase-3、JC-1,观察Mel是否能够抑制铁负荷过重导致的细胞凋亡。结果⑴Mel对巨核系细胞CHRF增殖和凋亡的影响:①细胞计数:在观察周期内,随着孵育时间的延长,正常培养组细胞增殖明显,对照组细胞数量则明显减少,48h、72h分别为（3.3±0.7）×105/ mL、（4.4±0.4）×105/ mL,仅为同期正常组细胞数的62.3% （P=0.001）和37.9%（P=0.000）,差异有统计学意义。加入浓度为20、50、100、200和500 nmol/L Mel后,在浓度>50 nmol/L Mel组细胞数量较对照组有明显增加,差异有统计学意义。细胞存活率显示,在浓度50 nmol/L以上Mel组细胞存活率明显提高,与对照组比较,差异有统计学意义。其中,浓度200nmol/L时保护作用最强,细胞存活率由（66.8±3.8）%升至（81.6±5.2）% （n=4,P <0.001）。XTT法检测细胞增殖情况显示:Mel在浓度>100nmol/L作用48、72小时后,OD值较对照组明显增加,差异有统计学意义（P <0.05）。②抗凋亡作用:Mel 200 nmol/L作用72小时后,CHRF细胞Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表达较对照组有明显下降,分别由（42.9±5.8）%、（29.5±5.6）%、（47.7±3.4）%降至（31.7±6.8）% （P<0.05）、（21.8±1.7）% （P <0.05）和（37.2±6.4）%（ P <0.05）。其中,JC-1的表达与TPO组（20.7±5.2）%比较,差异有统计学意义（ P <0.05）,而Annexin V/PI、Caspase-3的表达与TPO组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。③加入Mel后CHRF细胞的磷酸化AKT、ERK1/2水平明显增高,分别由（5.9±0.1）%、（6.1±0.4）%升至（9.5±0.1）%（ P <0.05）、（9.3±0.5）%（ P <0.05）,差异有统计学意义。（2）铁对CHRF细胞凋亡的影响:浓度0.3mmol/L FeCl3作用8小时后,CHRF细胞存活率下降,凋亡明显,Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表达与对照组比较,分别为（37.9±2.7）% vs （16.4±2.8）%、（26.5±4.5）% vs （6.4±1.5）%和（35.7±5.6）% vs （10.8±3.1）%,差异有统计学意义。（3） Mel 200nmol/L可以拮抗铁毒性,减少细胞凋亡,Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表达,分别由（37.9±2.7）%、（26.5±4.5）%、（35.7±5.6）%降为（26.9±2.2）%、（19.0±3.9）%、（26.0±5.1）%,差异有统计学意义。结论（1）Mel具有提高CHRF细胞存活率,促进细胞增殖的作用。（2）Mel能够抑制无血清培养诱导的CHRF细胞凋亡,具有保护作用,其抗凋亡作用与TPO基本相当。（3） Mel抑制巨核细胞凋亡的保护机制可能是通过AKT、ERK信号通路发挥作用。（4）铁负荷过重可以引起巨核细胞凋亡损害,Mel能够拮抗该毒性作用,,具有减少巨核细胞凋亡的作用。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 论文正文：Melatonin 对巨核细胞凋亡的影响及对铁负荷过重损害的保护作用研究
• 前言
• 第一部分 Melatonin 对巨核细胞凋亡的影响及作用机制研究
• 1 实验材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二部分 铁负荷过重对巨核细胞的凋亡损害及 Melatonin 的保护作用研究
• 1 实验材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文