论文摘要
枳实始载于《神农本草经》,为芸香科植物酸橙Citrus aurantiurmL.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。具有破气消积,化痰散痞的功效。主要有效成分为黄酮类、挥发油类及生物碱类成分。研究表明,不同批次枳实中黄酮类成分存在种类差异,究竟是什么原因引起这种差异还不清楚。不同结构的黄酮类成分生物活性不同。那么,同为枳实中主要有效成分的生物碱和挥发油成分是否也有差异?本文探讨从饮片性状鉴定品种的可行性,基于枳实品种产地的多样,从主要黄酮类成分的种类及含量、辛弗林的含量、挥发油成分的种类及含量、IR吸收特征,分析有效成分种类及含量与品种产地的关系。系统研究了近50年来国内外枳实的研究概况,并在此基础上进行了以下实验研究:探讨从饮片性状鉴定品种的可行性。《中国药典》2005版枳实项下性状描述为半球形,少数为球形,直径0.5～2.5cm。外果皮黑绿色或暗棕绿色,切面中果皮略隆起,厚0.3～1.2cm,黄白色或黄褐色,边缘有1～2列油室,瓤囊棕褐色。依据文献研究结果,从枳实主产地四川、湖南、江西、贵州采集了30个批次枳实药材,进行品种鉴定。将药材自中部横切为两半,低温干燥,测量瓤囊直径和横断面直径,计算瓤囊面积占横切面面积的百分比。结果显示,来源于酸橙及其变种臭橙C.aurantium‘Xiucheng’和枳橙C.aurantium×P.trifoliata枳实的瓤囊面积占横切面面积的百分比范围为0.57%～15.0%;香橙枳实的范围为13.2%～19.9%;甜橙枳实的范围为20.1%～44.2%;来自江西和重庆枸橘的范围为25.4%～70.6%,而来自福建枸橘的范围与甜橙相似。表明以饮片瓤囊面积占横切面面积百分比为指标,有助于对枳实饮片进行鉴定。采用RRLC法分析不同品种产地枳实中主要黄酮类成分的种类和含量,确定枳实中黄酮类成分的种类和含量是否与品种和产地有关。黄酮类成分与品种相关性研究结果显示,来源于酸橙及其栽培变种臭橙、枳橙和香橙枳实的主要黄酮类成分为橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和柚皮芸香苷,且酸橙及其栽培变种臭橙、枳橙柚皮苷和新橙皮苷含量高于柚皮芸香苷和橙皮苷,而香橙则正好相反;来源于甜橙枳实的主要黄酮类成分为橙皮苷和柚皮芸香苷,不含有柚皮苷和新橙皮苷。黄酮类成分与产地相关性研究结果表明,不同产地同一品种枳实中黄酮类成分种类和各成分含量范围无区别,同一产地不同品种枳实中黄酮类成分种类不同。目前研究结果表明,枳实中黄酮类成分种类和含量的差异与品种有关,与产地无关。测定不同品种产地枳实中生物碱辛弗林的含量,探讨不同品种产地枳实中辛弗林含量是否存在差异。结果显示,辛弗林的含量差异与品种和产地没有明显相关性。针对目前枳实品种分类存在的问题,即香橙是否为酸橙的变种问题,采用RRI.C法测定了不同品种产地枳实的指纹图谱,借助中药色谱指纹图谱相似度评价软件和系统聚类软件,为枳实品种分类提供依据。27个样品的指纹图谱分为三类,酸橙及其栽培变种臭橙和枳橙为一类,香橙为一类,甜橙为一类:同品种各批次样品间相似度很高,均高于0.9;而酸橙与香橙间、酸橙与甜橙间的相似度均低于0.2;香橙与甜橙间的相似度范围为0.701～0.783。在系统聚类图中,酸橙、甜橙和香橙各聚为一类。此结果与《中国植物志》分类一致,支持了香橙不属于酸橙栽培变种的结论。由于香橙在主产地江西产量很大,建议中国药典单独将香橙作为枳实的品种来源。采用RRLC-MS分析枳实中存在的其它黄酮类成分,研究不同品种枳实中是否存在其它成分的差异。采用电喷雾串联质谱技术[（±）ESI-MSn]分析主要化学成分的裂解特征,获得了反映结构特征及其差异的质谱裂解规律。参考多篇国内外相关色谱分析文献,综合考虑色谱条件、保留时间、出峰顺序、紫外光谱等数据,对酸橙、香橙和甜橙三个品种枳实的指纹图谱进行色谱峰归属。辨认了已知的四种黄酮类成分柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷。此外,从酸橙中发现了一个独有的化学成分,还找到一个酸橙和香橙中含有而甜橙中不包含的成分,它们的具体结构还需进一步确认;从甜橙中新辨认了两个化合物,为忍冬苷和3＇,4＇,5,7-四羟基黄酮-7-0-芸香糖,其中忍冬苷为甜橙中独有的化学成分;从香橙中新辨认了3＇,4＇5,7-四羟基黄酮-7-0-芸香糖。采用GC-MS分析挥发油中的化学成分,探讨化学成分的种类及含量是否与品种产地有关。对分析所得成分的质谱数据经数据库检索并与有关标准图谱资料核对定性,运用化学模式识别技术对GC-MS总离子流图进行分析。聚类结果显示,所有甜橙枳实聚为一类,酸橙及其栽培变种臭橙和枳橙与香橙枳实聚为一类,香橙的三个样品聚集为小类,表明枳实挥发油中的成分与品种有关。此外,同一品种相同产地的差异小于同一品种不同产地。表明枳实挥发油中成分除与品种有关,还受到产地的影响。探讨采用IR进行品种鉴定的可行性。对黄酮类成分种类存在差异的十个批次枳实进行红外光谱的测定,采用红外光谱仪软件对样品谱图进行相关性研究。结果显示,甜橙三个批次枳实的红外光谱谱图与枳实对照药材红外光谱谱图相关系数低于0.50。酸橙和香橙枳实7个批次的红外光谱谱图与其比较相关系数高于0.90。因此,IR可以判断枳实中是否存在黄酮类成分种类差异。
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