激素性股骨头坏死模型的骨髓间充质干细胞生物学特性评估

论文摘要

研究背景：股骨头坏死是骨科常见的疾病。临床上常见的股骨头坏死的原因主要分为：创伤性和非创伤性股骨头坏死。非创伤性股骨头坏死的常见原因有使用激素、酗酒、血红蛋白病、减压病等,目前,激素性股骨头坏死占非创伤性股骨头坏死的首位。在临床实践中,系统性红斑狼疮、白塞病、肾病综合征、妊娠并发症等疾病在治疗中应用激素,他们共同的特点是患者有不同程度的血管炎表现,这类患者在使用激素治疗后容易产生股骨头坏死。目前,部分骨科医师尝试使用患者自体骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死,主要是将多能的骨髓间充质干细胞向成骨细胞和血管内皮细胞分化,其治疗的基础是生物学特性正常的骨髓间充质干细胞。而以往的实验侧重于研究股骨头坏死模型的影像学表现、病理变化及血液的变化,而对于骨髓间充质干细胞生物学的研究较少且不全面,患者自体干细胞的生物学特性及其细胞外基质的成分及比例是否发生改变尚不明确,其自体骨髓间充质干细胞是否适合用于治疗股骨头坏死还不明确。方法：（1）利用牛血清和激素建立股骨头坏死模型,将20只250g-280g健康SD大鼠随即分为实验组、对照组。实验组动物腹腔注射牛血清（10ml/kg）2次,间隔1周,于最后一次血清注射两周后连续3d肌肉注射甲基强的松龙（40ml/kg）；对照组动物腹腔注射0.9%氯化钠注射液（10ml/kg）两次,间隔1周,于最后一次注射2周后连续3d肌肉注射0.9%氯化钠注射液（40ml/kg）。（2）于最后一次肌肉注射2周后,将实验动物拉颈处死,取出股骨头,固定、石蜡包埋、切片行苏木精-伊红染色,于光镜下观察骨结构、细胞核变化。（3）骨髓间充质干细胞生物学特性的检测：①检测骨髓间充质干细胞的增殖率。②检测的骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化能力。结果：（1）与对照组相比,实验组软骨下区几乎为脂肪组织所代替,骨小梁稀疏,排列紊乱,脂肪细胞明显增多,大量脂肪细胞堆积,体积增大；部分标本可见骨小梁开始萎缩、变细。（2）细胞增值率检测显示,两组在第7天时吸光度有统计学差异；行成骨定向诱导后,ALP染色结果显示,具有成骨细胞特异性的碱性磷酸酶含量，实验组少于对照组，茜素红染色结果显示，钙结节的数量，实验组少于对照组；成脂定向诱导后，行油红O染色，实验组的成脂细胞明显少于对照组的成脂细胞。结论：（1）联合使用异种血清和糖皮质激素可以建立激素性股骨头坏死的SD大鼠模型；（2）实验组骨髓间充质干细胞具备干细胞的生物学特性，但相对于对照组其增殖能力减弱，成骨、成脂潜能减弱。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 激素性股骨头坏死动物模型的建立及验证
• 1. 材料与方法
• 1.1 主要试剂及仪器
• 1.2 方法
• 2. 结果
• 2.1 一般形态学观察结果
• 2.2 股骨头标本病理学观察
• 3. 讨论
• 第二部分 激素性股骨头坏死动物模型生物学特性的评估
• 1. 材料与方法
• 1.1 主要试剂及仪器
• 1.2 方法
• 1.3 统计学方法
• 2. 结果
• 2.1 骨髓间充质干细胞的增值率检测结果
• 2.2 骨髓间充质干细胞的成骨定向诱导检测结果
• 2.3 骨髓间充质干细胞的成脂定向诱导检测结果
• 3. 讨论
• 第三部分 结论
• 参考文献
• 综述 股骨头坏死动物模型的研究进展
• 参考文献
• 发表文章
• 致谢