RNAi技术在抑制HBV复制和表达中的应用

论文摘要

乙型肝肝炎病毒（HBV）是一种长3.2Kb的DNA病毒，它几乎在整个肝脏可以复制。虽然高活性的乙肝疫苗已问世20多年，但HBV感染仍然是一种危害全球健康的重大疾病。据统计全球约有3.5亿的HBV感染者，而中国又是HBV感染的高发区，约有50％～70％的人群感染过HBV，其中约8％～12％的人群，即超过1亿人口是乙肝表面抗原携带者，每年因急慢性HBV感染致死的人数约有一百万之多。目前，干扰素和腺苷类似物是FDA批准的，仅有的几种抑制HBV复制的药物，但它们的作用效果都很有限。腺苷类似物如lamivudine和adefovir dipivoxil的作用原理是通过抑制HBV逆转录活性，而直接影响病毒复制的，虽然这类药物能高效地清除血清中的HBV-DNA，但不能完全清除体内感染的HBV，因此停止用药后HBV会复发，并且用药时间的延长会导致HBV病毒突变体的产生。 RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术是指内源性或外源性双链RNA（dsRNA）介导的，细胞内mRNA发生特异性降解，并导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失的一种现象。这一现象属于转录后的基因沉默机制（Posttranscriptional gene silencing，PTGS）。在哺乳动物细胞中RNAi活性主要是通过21～23nt长的small interfering RNAs（siRNA）来实现的。研究表明siRNA已在很多领域显示出对目的基因的清除作用，因此，RNAi也成为治疗HBV感染的一种可选的重要手段。 自1998年2月，Fire和Mello两位科学家首次在Nature上发表了：把dsRNA注射入一种线虫（Caenorhabditis elegans）体内，该dsRNA可以诱导基因靶向专一性的基因表达静寂（gene silencing）等研究报告以来，许多研究工作者都先后用RNAi技术，在线虫、果蝇、植物、动物卵细胞和哺乳类细胞中进行了大量研究，

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第1章 细胞培养及siRNA的序列设计
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 第2章 Stealth siRNA对HBV复制和表达的抑制
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第3章 针对HBV的shRNA表达质粒的构建
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 第4章 稳定表达的shRNA对HBV复制和表达的抑制
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间成果
• 附录
• 致谢
• 原创性声明及版权使用授权说明