家族性慢性良性天疱疮一家系ATP2C1基因突变检测

论文摘要

家族性慢性良性天疱疮一家系ATP2C1基因突变检测研究背景家族性慢性良性天疱疮又称Hailey-Hailey病（Hailey-Hailey Disease,HHD,OMIM 169600）,是一种少见的常染色体显性遗传性大疱性皮肤病。该病由Hailey兄弟于1939年首次报道,男女发病率大致相等,70%的患者有家族史。本病典型的临床特征为皮肤皱褶部位（颈部、腋下、腹股沟、外阴等）反复出现瘙痒性水疱、糜烂。组织病理显示表皮内棘层松解,基底层上方裂隙及水疱形成,疱内可见棘刺松解细胞,基底层上呈倒塌砖墙样外观。目前研究表明,HHD是由位于染色体3q21-24上的ATP2C1基因突变所致。ATP2C1基因突变方式有错义突变、剪切位点突变、无义突变、插入或缺失突变等,大部分基因突变均导致提前终止密码子（premature termination codon,PTC）形成。ATP2C1基因突变导致角质形成细胞内钙离子调节障碍,而钙离子对角质形成细胞间黏附有重要作用,细胞内钙离子信号传导障碍可导致棘层松解的发生,从而出现特有的病理改变。虽然国内外学者对ATP2C1基因突变进行了大量的研究,但基因型与表型的关系并不明确。目的检测1个中国汉族人HHD家系患者的ATP2C1基因突变,回顾国内报道的进行突变筛查HHD的临床特点和相关突变资料,以期获得更多的基因型和表型的相关信息,为基因诊断和遗传咨询提供科学依据。方法收集1个中国汉族人HHD家系4例患者及其3例健康家庭成员和100名健康对照的外周血标本,采用改良盐析法提取外周血白细胞中的DNA,通过聚合酶链反应（PCR）扩增ATP2C1基因的所有外显子编码区及其侧翼序列,用直接测序的方法进行序列分析。对国内报道的进行突变筛查HHD相关资料进行检索,对其临床和突变特点进行分析总结。结果该家系4例患者ATP2C1基因的第7号外显子的第457位碱基胞嘧啶（C）被胸腺嘧啶（T）替代,使ATP2C1基因第153位密码子CGA转变为TGA,导致编码氨基酸由精氨酸被终止密码子取代。3例正常人和100例健康对照均未发现此突变。ATP2C1基因大部分突变均形成PTC,国内引起PTC的约占ATP2C1基因总突变的54%（19/35）。结论无义突变c.457C＞T（p.R153X）是导致该家系临床表型的特异性突变,而不是单核苷酸多态性（SNP）。本研究进一步探讨了HHD基因型和表型之间的关系,有助于今后开展HHD的遗传咨询、产前诊断和基因治疗。

论文目录

• 目录
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• 正文
• 1 引言
• 2 实验材料和方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 实验试剂
• 2.2.1 病理试剂
• 2.2.2 DNA提取试剂
• 2.2.3 PCR反应、电泳试剂
• 2.2.4 PCR产物纯化和测序试剂
• 2.3 实验器材
• 2.3.1 临床资料获取、组织病理检查器材
• 2.3.2 DNA提取器材
• 2.3.3 PCR反应、产物纯化、电泳、测序仪器
• 2.4 分析软件和电子数据库查询信息
• 2.5 实验方法和步骤
• 2.5.1 皮肤标本的组织病理制备
• 2.5.2 基因组DNA的制备
• 2.5.3 ATP2C1基因引物设计
• 2.5.4 PCR反应
• 2.5.5 PCR产物琼脂糖凝胶电泳
• 2.5.6 PCR产物纯化和DNA测序
• 2.6 查阅中国报道的HHD突变病例资料
• 3 结果
• 3.1 临床和组织病理特点
• 3.2 家系遗传特点分析及家系图
• 3.3 测序结果
• 3.4 中国报道的HHD突变病例的资料总结
• 4 讨论
• 5 结论
• 6 参考文献
• 附录
• 致谢
• 课题综述:家族性慢性良性天疱疮的分子遗传学研究进展