论文摘要
背景急性脑梗死导致的神经功能障碍,一直是困扰医学的难题。新近发现,Nogo-A是最为强烈的神经轴突再生抑制因子,通过与受体NgR等结合转导抑制信号,阻碍神经修复和再生,是造成神经功能恢复困难的重要因素。电针是治疗脑梗死的有效方法之一,但机制尚不十分清楚。我们前期研究提示电针对脑缺血损伤有保护作用与调控抑制因子neurocan表达有关,但对Nogo-A抑制信号传导有何影响,目前国内外还未见翔实的研究报道,值得深入探讨。目的观察电针对大鼠脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）皮层不同时间点细胞超微结构及神经轴突再生抑制因子Nogo-A表达的影响,从中枢神经再生抑制信号表达的新角度探讨针刺治疗缺血性中风、促进神经功能修复的机理,为电针的临床应用提供新的理论与方法。方法将145只雄性Sprague-Dawley （SD）大鼠（月龄3个月,体重240±40g）采用随机数字表法分为I/R组（105只）、假手术组（30只）和空白组（10只）。I/R组采用改良ZeaLonga法制备左侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion, MCAO）再灌注模型,再采取随机数字表法分为3组：电针组（35只）、模型组（35只）和假穴位组（35只）。其中,电针组术后选取“大椎”、“百会”穴每天给予30min电针治疗,连续28天；假穴位组术后选取“大椎”、“百会”穴右侧旁开1寸处给予30min电针治疗,连续28天。假手术组仅做手术创伤。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察电针组、模型组和假穴位组I/R第7d大鼠脑梗死范围的变化；透射电镜观察电针对大鼠I/R后1、7、28d双侧脑皮层细胞超微结构的干预作用；免疫组织化学染色观察电针对大鼠I/R后1、7、28d双侧脑皮层Nogo-A表达的影响,并与模型组、假穴位组比较。所有数据使用SPSS13.0软件进行统计分析。结果①大鼠神经行为学评分：I/R后第1、7d,电针组大鼠神经行为学评分与模型组和假穴位组同期比较,差异无统计学意义（P>0.05）；I/R第28d,电针组大鼠神经行为学评分与模型组、假穴位组比较差异有统计学意义（P<0.05）；模型组和假穴位组大鼠神经行为学评分同期比较差异无统计学意义（P>0.05）②脑梗死体积：I/R第7d电针组大鼠脑梗死体积百分率明显小于模型组和假穴位组,差异有统计学意义（P<0.05）；模型组大鼠脑梗死体积百分率与假穴位组比较差异无统计学意义（P>0.05）。③超微结构：透射电镜观察空白组和假手术组大鼠脑皮层结构分明,细胞形态正常。模型组和假穴位组各时间点大鼠脑皮层缺血区均出现组织水肿,神经元、胶质细胞变性坏死和血管塌陷断裂等不同程度的病理改变,以I/R第7d病变最严重,28d脑组织缺血性损伤逐步恢复,神经元肿胀消失,胶质细胞反应性增生,毛细血管再生。电针组大鼠脑皮层缺血区神经元、胶质细胞及毛细血管等超微结构的损伤均较同期模型组、假穴位组减轻。模型组和假穴位组各时间点大鼠脑对侧皮层亦出现神经细胞胞体肿胀,细胞器水肿,核染色质轻度溶解,毛细血管内皮细胞肿胀,管腔狭窄等轻度病理改变,以缺血再灌注后第7d最明显,28d明显减轻。上述病理改变均较同期患侧皮层缺血区病变程度明显减轻,且不足以引起支配侧肢体神经功能缺失。电针组大鼠脑对侧皮层神经元、胶质细胞及毛细血管等超微结构的改变均较同期模型组、假穴位组减轻。④Nogo-A阳性细胞表达：免疫组织化学显示空白组大鼠脑皮层Nogo-A阳性细胞呈基础表达,Nogo-A蛋白主要表达于脑组织神经元和少突胶质细胞胞浆中。假手术组Nogo-A阳性细胞表达量与空白组同期比较差异无统计学意义（P>0.05）。I／R后第1d,Nogo-A阳性细胞表达开始增多,7d达到高峰,28d明显下降,但仍高于基础水平,与空白组、假手术组同期比较差异有统计学意义（P<0.05）。电针组I／R后1、7、28d大鼠脑皮层缺血区Nogo-A阳性细胞表达量均明显低于同期模型组和假穴位组,差异有统计学意义（P<0.05）,但模型组与假穴位组同期对比差异无统计学意义（P>0.05）。I/R后1、7、28d各时间点大鼠脑对侧皮层亦可见Nogo-A阳性细胞表达反应性上调,7d最明显,28d后下降至基础水平。电针组I/R后1、7、28d各时间点大鼠脑对侧皮层Nogo-A阳性细胞表达量均低于同期模型组和假穴位组,差异有统计学意义（P<0.05）；假穴位组与模型组同期对比差异无统计学意义（P>0.05）。结论①Nogo-A参与了抑制脑缺血损伤后神经轴突再生的病理过程。②电针可减大鼠脑缺血再灌注损伤,促进神经功能修复,可能与其通过改善大鼠神经行为学评分、缩小脑梗死范围、减轻脑组织超微结构的损害、抑制轴突再生抑制因子Nogo-A的表达、诱导神经重塑等机制相关,此为电针治疗缺血性中风、促进神经功能可塑性的机理研究提供新的依据。