血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞的抑制效应及其机制研究

论文摘要

第一部分血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106的急性毒性实验研究目的:观察血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106的急性细胞毒作用。方法:首先采用MTT法检测不同超声辐照时间（0 s、10 s、30 s、60 s、90 s）及不同HMME浓度（0、10、20、40、50μg/ml）对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106存活率的影响,以确定最佳辐照时间和HMME浓度,声动力参数（超声频率10.50 MHz、声强:0.5 W/cm2）。将大鼠骨肉瘤细胞UMR-106悬液分为:对照组（C组）、单纯血卟啉单甲醚组（HMME组）、单纯超声组（U组）和声动力组（SDT组）,以MTT法检测各组细胞的存活率,AnnexinⅤ/PI双染色经流式细胞技术检测其死亡方式,并以透射电镜观察细胞超微结构改变。结果:超声辐照30 s、60 s及90 s时,可明显降低大鼠骨肉瘤细胞UMR-106的存活率（P<0.05）,辐照时间为10 s时,对细胞存活率无明显影响（P>0.05）;单纯HMME对细胞存活率无明显影响（P>0.05）。当辐照时间为10 s、HMME为20μg/ml和50μg/ml时,细胞存活率明显下降（P<0.05）,AnnexinⅤ/PI双染色检测及透射电镜结果显示UMR-106细胞存在坏死与凋亡,透射电镜可见大鼠骨肉瘤细胞UMR-106微绒毛减少,线粒体、内质网肿胀,胞浆内大小不一空泡形成,线粒体髓样变,核内假性包含体,核周隙增大,胞膜破裂、胞质流失,染色质边集,核碎裂、溶解等改变。结论:HMME是一种有效的声敏剂,其声动力效应对体外培养大鼠骨肉瘤细胞UMR-106具有显著杀伤作用,可望为骨肉瘤治疗提供新的手段。第二部分血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106的抑制效应及其机制研究目的:从细胞增殖状况观察血卟啉单甲醚声动力效应对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106的迟发抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:将大鼠骨肉瘤细胞UMR-106悬液分为对照组（C组）、单纯血卟啉单甲醚组（HMME组）、单纯超声组（U组）、声动力组（SDT组）。声动力参数（超声频率10.50 MHz、声强:0.5 W/cm2、辐照时间:10秒）,HMME:20μg/ml,采用MTT法检测12 h、24 h、36 h、48 h的大鼠骨肉瘤细胞UMR-106存活率。经流式细胞仪检测,罗丹明123（Rhodamine 123）检测线粒体膜电位（△Ψm）;二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）检测细胞内活性氧,Fluo-3-Am（乙酰甲酯衍生物）检测细胞内钙离子浓度的变化。33258核染色观察细胞核的形态改变。结果: MTT检测法显示SDT组细胞存活率分别为69.42%（12h）, 50.10%（24h）, 44.37%（36h）, and 43.26%（48h）,与U组、C组和HMME组间同一时间段比较,统计学上有显著差异（P<0.01）。经流式细胞仪检测,线粒体膜电位降低的细胞百分比、细胞内活性氧增高和细胞内钙离子增高的细胞百分比,SDT组与C组,HMME组和U组相比,有显著差异（P<0.01）。33258细胞核染色显示坏死与凋亡,细胞核浓缩和絮状改变,核边集。结论: HMME-SDT能显著抑制肿瘤增殖活性,增殖活性受抑制可能与细胞内活性氧和细胞内钙离子浓度增高,膜损伤有关。第三部分血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106移植瘤的抑制效应目的:观察血卟啉单甲醚在UMR-106细胞移植瘤大鼠组织分布情况,以及其声动力效应对移植瘤的抑制作用。方法:静脉注射血卟啉单甲醚,在不同时间点通过高效液相荧光检测法（HPLC）检测血卟啉单甲醚在UMR-106移植瘤大鼠肝,肌肉,肿瘤组织达到期峰值的时间,确定最佳的超声辐照时间。UMR-106移植瘤大鼠分对照组（C组）、单纯HMME组（HMME组）、单纯超声组（U组）、声动力组（SDT组）,处理后观察其肿瘤体积和重量改变,了解抗肿瘤效应。肿瘤组织石腊包埋、切片,HE染色观察肿瘤组织形态学改变,进行免疫组化染色、IPP图像分析PCNA、TUNNEL的表达情况,探讨其抑抗瘤机制。结果:尾静脉注射HMME后,3小时肿瘤组织中HMME浓度达峰值。静脉注射HMME,3小时后声动力处理,SDT组与其它对照组比较,肿瘤的体积和重量减小,差异显著性有统计学意义﹙P<0.01)。肿瘤组织石腊切片,IPP图像分析PCNA表达下降,TUNNEL表达增加,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106移植瘤增殖有显著的抑制效应,可能与HMME-SDT抑制移殖瘤增殖和诱导凋亡两方面的作用有关。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文题名：血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞的抑制效应及其机制研究
• 前言
• 第一部分 血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106 的急性毒性实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠骨肉瘤细胞UMR-106 的抑制效应及其机制研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三部分 血卟啉单甲醚声动力作用对大鼠UMR-106 细胞移植瘤的抑制效应
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述1
• 文献综述2
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表学术论文、参研项目等