异源冷冻精子诱导大菱鲆和大西洋牙鲆雌核发育的研究

论文摘要

本文探索了异源冷冻精子诱导大菱鲆（Scophthalmus maximus）和大西洋牙鲆（Paralichthys dentatus）雌核发育的条件,建立了采用冷冻保存的鲈鱼（Lateolabrax japonicus）精液诱导这几种海水鱼类雌核发育的方法,并采用不同的方法对雌核发育后代做了分析鉴定。为大规模培育这几种鱼的全雌苗种奠定了基础。研究结果如下:1.鲈鱼精子,不管是否经过紫外线照射处理,都可以刺激大菱鲆卵开始胚胎发育过程,并且两组卵的胚胎发育过程完全相同。卵在（13±0.2）℃海水中大约95小时至出膜前期。由于没有经过染色体加倍化处理,两组胚胎均发育畸形,呈现出典型的单倍体综合症。实验组未发现有正常形态的仔鱼。从而确定,鲈鱼精子与大菱鲆卵子杂交所得后代即为大菱鲆的单倍体。通过对雌核发育冷休克起始时间,冷休克温度和冷休克持续时间的筛选和优化,确定了利用鲈鱼未灭活精子诱导大菱鲆卵雌核发育的最佳条件是:在13℃下授精6min后,用（-1～0）℃的海水对卵进行持续25min的冷休克处理。对孵出的仔鱼养殖5到7天,单倍体苗会全部死掉,剩下的正常形态苗种即为大菱鲆雌核二倍体。比较正常二倍体、单倍体和人工诱导雌核发育二倍体胚胎的发育速度和形态学特征,结果表明,不同胚胎发育速度有明显区别,表现为:正常二倍体和单倍体>人工诱导雌核发育二倍体。形态学上单倍体胚胎表现为头小,尾短,活动能力弱,破膜困难,人工诱导雌核发育二倍体胚胎则同正常二倍体胚胎同期特征一致。2.使用鲈鱼精子经紫外照射灭活后与大西洋牙鲆卵受精,按照受精后5min开始对卵进行3℃、30min的冷休克处理,获得了大批的仔鱼。对后代进行染色体技术鉴定,结果表明,未经冷休克处理的胚胎染色体数目为n=24,是大西洋牙鲆单倍体;而经冷休克诱导处理所得到的鱼苗染色体数为2n=48,即为大西洋牙鲆雌核发育鱼苗。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献综述
• 1 鱼的性别控制研究进展
• 1.1 鱼类的性别
• 1.1.1 鱼类的性染色体类型
• 1.1.2 鱼类性别分化的特点
• 1.2 鱼类性别控制的意义
• 1.2.1 单性养殖
• 1.2.2 繁殖上需要
• 1.2.3 其它经济目的
• 1.3 鱼类性别控制的常用方法
• 1.3.1 人工挑选法
• 1.3.2 性激素人工诱导
• 1.3.3 种间杂交法
• 1.3.4 雌核发育
• 1.3.5 雄核发育
• 1.3.6 遗传性别控制
• 1.3.7 其它
• 2 鱼类雌核发育研究进展
• 2.1 鱼类雌核发育的诱导方法
• 2.1.1 精子的选用和染色体的遗传失活
• 2.1.2 染色体加倍
• 2.2 雌核发育后代的鉴定及遗传分析
• 2.2.1 形态学遗传标记
• 2.2.2 染色体组鉴定
• 2.2.3 同工酶分析
• 2.2.4 分子生物学标记
• 2.3 雌核发育的外界制约因素
• 2.4 雌核发育个体的生长与发育
• 2.4.1 雌核发育后代的存活率
• 2.4.2 生长与发育
• 2.4.3 性别
• 2.4.4 繁殖
• 2.5 潜在应用
• 2.5.1 单性种群利用
• 2.5.2 快速建立纯系
• 2.5.3 性别机制的判别
• 一 异源冷冻精子诱导大菱鲆雌核发育
• 1.1 诱导大菱鲆雌核发育异源精子的选用
• 1.1.1 材料和方法
• 1.1.2 结果
• 1.1.3 讨论
• 1.2 大菱鲆单倍体的制备
• 1.2.1 材料和方法
• 1.2.2 结果
• 1.2.3 讨论
• 1.3 人工诱导大菱鲆雌核发育二倍体冷休克条件的优化
• 1.3.1 材料和方法
• 1.3.2 实验结果
• 1.3.3 讨论
• 1.4 大菱鲆单倍体，雌核发育二倍体以及正常二倍体的比较
• 1.4.1 方法
• 1.4.2 结果
• 1.4.3 讨论
• 二 异源冷冻鲈鱼精子诱导大西洋牙鲆雌核发育
• 2.1 试验材料和方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 杂交和雌核发育诱导实验
• 2.2.2 染色体鉴定
• 2.3 讨论
• 三 结论
• 3.1 鱼类雌核发育异源精子的选择
• 3.2 雌核发育诱导的冷休克条件
• 3.3 雌核发育后代的鉴定
• 3.4 雌核发育在建立纯系上的作用
• 3.5 雌核发育在鱼类性别控制和全雌育种上的意义和作用
• 参考文献
• 致谢