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【摘要】目的：使用HPLC方法手段来针对蜂王浆当中掺入的人工合成癸烯酸进行测定；方法：针对掺入人工合成癸烯酸标准品和天然蜂王浆的图谱差别进行对比，发现人工合成癸烯酸的离子峰；结果：这种方法针对掺假食品检测具有一定的创新性，应用难度较低，值得推广。
【关键词】高效液相色谱串联质谱；蜂王浆；蜂王浆冻干粉；人工合成癸烯酸
癸烯酸也可以称为10-羟基-a-癸烯酸，是蜂王浆中的高效生物活性物质，正常来说纯正的蜂王浆中癸烯酸含量约为2%以下，国家规定蜂王浆中癸烯酸含量达到或超过1.4%为合格品，如果能够达到1.8%则为优等品。在其之上，癸烯酸含量为5%则为一等品，达到4%则为二等品，所以不难看出，癸烯酸含量可以直接决定蜂王浆制品的价格。但现在已经有为数不少的人工癸烯酸流入市场，很多不法商贩将其加入到蜂王浆产品中以次充好，不仅扰乱了市场秩序，更直接危害了人体健康。
现在已经有很多种方法用于检测癸烯酸含量，但至今对于人工合成癸烯酸的检定方面还仍然存在一定的空缺，本文结合hplc法，来按照不同比例加入人工合成癸烯酸，将其和样品进行对照，扫描图谱差异，最终发现存在扫描图谱方面的一系列差异。人工合成癸烯酸的特征峰并不会出现于天然蜂王浆之中，这种检测思路具有较强的创新性，处理难度较低，也具有较快的分析速度，可以推广使用。
一、材料与方法
（一）仪器与试剂
HES-II高效液相色谱串联质谱仪（配有Electrosprayionsource）：ThermoFinniganTSQQuantumUltra；BSA224S天平：Satorius；25mL容量瓶；微孔滤膜（0.22μm，水相）：Agelatechnologies。无水乙醇（分析纯）、无水甲醇（色谱纯）、甲酸（色谱纯）：Honeywell；去离子水；人工合成10-HDA（99%）：江苏省食品药品检验所提供。
（二）色谱条件
（1）高效液相色谱条件
色谱柱选用SepaxBR-C18（2.1mm×100mm，5μm）；柱温为35℃；流动相为A.甲醇-B.0.1%甲酸水溶液，流速为0.25mL/min；采用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，0min～1min，A：30%、B：70%；1min～3.5min，A：30%～95%，B：70%～5%；3.5min～5.5min，A：95%，B：5%；5.51min～7.0min，A：95%～70%，B：5%～30%。液相分离采用在线阀切换技术。进样量为10μL。
（2）质谱条件
采用电喷雾离子源（ESI）；毛细管电压：3.5kV；干燥气温度：350℃；干燥气流量（氮气）：5L/min；鞘气温度：400℃；雾化器压力：50psig的条件下，进行正离子SRM扫描。人工合成癸烯酸检测的母离子为225m/z，子离子包括163m/z和181m/z。
（三）样品前处理
称取样品0.100g（精确到0.1mg）于25mL容量瓶，无水乙醇溶解、定容，超声提取30min，过微孔滤膜待进样。同时配制人工10-HDA的标准品溶液。（规定0.100g人工10-HDA标准品定容于25mL容量瓶，人工合成癸烯酸的浓度为100%）。
（四）人工10-HDA的标准品溶液的配制
精确称量0.100g人工10-HDA标准品，用无水乙醇定容于25mL容量瓶中，然后取该标准溶液用无水乙醇分别稀释成0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%和5.0%6个标准点制定标准曲线。
（五）样品添加回收试验
对天然蜂王浆及其冻干粉添加3个浓度点（包括0.05%、0.5%、5.0%）的人工合成癸烯酸，每一个浓度点做3个平行试验。
二、分析
将不同比例的人工合成癸烯酸标准品和天然蜂王浆样品首先采用1.3中的方法进行处理，之后采用1.2的步骤来进行检测，扫描每个样品，最后找到一系列图谱上的差异，发现了人工合成癸烯酸中的特征离子峰，该特征峰并没有出现于天然蜂王浆当中。该特征峰中母离子值为225m/z、子离子则为163和181m/z。特征峰保留时间可以达到5min，这种检测方法可以分辨出蜂王浆中是否混有人工合成癸烯酸，蜂王浆冻干粉中人工癸烯酸的阴阳样品色谱分别如图1图2所示。
A.总离子流谱图；B.电喷雾正离子模式谱图。
图1天然蜂王浆冻干粉中人工10-HDA阴性样品色谱图
A.总离子流谱图；B.电喷雾正离子模式谱图。
图2蜂王浆冻干粉中人工10-HDA阳性样品色谱图
（一）线性范围讨论
取1.3中已配制好的人工10-HDA的标准品溶液用无水乙醇分别稀释成0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%和5.0%6个标准点进样，制定标准曲线，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线方程为Y=-3.223×103+7.759×105X，R2=0.999，在该标准范围内呈现良好的线性关系。
（二）精密度试验
选择0.1%标准浓度点溶液连续进样6次，进样量为10μL，记录色谱峰的峰面积，计算得出RSD值为1.24%。
（三）重复性试验
选择一个样品，平均分成6份，按照1.3样品前处理方法进行处理，试验结果的RSD值为1.78%，表明本方法的重现性良好。
（四）加标回收率试验
对天然蜂王浆及其冻干粉添加3个浓度点（包括0.05%、0.5%、5.0%）的人工合成癸烯酸，每一个浓度点做3份平行试验。回收率范围在85.1%～108.3%。
（五）样品测定
从市场随机抽取样品20份，其中蜂王浆10份、蜂王浆冻干粉10份，采用先前样品处理方法进行处理，经过计算后，结果见表1所示。
表1市场中的蜂王浆和蜂王浆冻干粉样品检测数据
从表1可以看出市场上的确已经存在部分掺入了人工合成癸烯酸的蜂王浆和蜂王浆冻干粉了。
三、结论
本文针对蜂王浆是否掺入人工合成癸烯酸进行了简要分析，很多不法商家在蜂王浆以及冻干粉当中掺入人工合成癸烯酸来非法牟利，所以针对癸烯酸的物质鉴定分析就显得尤其重要。本文提出了一种快速而高效的检测方法，处理简单、检测时间段，定量检测效果好，可以推广使用。
参考文献
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