论文摘要
生长激素是由脑垂体前叶嗜酸性细胞合成和分泌的一种单一肽链的蛋白质，能够促进动物生长、增加产奶量、提高饲料转化效率和瘦肉率。本实验主要是立足于重组牛生长激素的活性检测和体内药物动力学研究。首先通过手术建立去垂体大鼠动物模型，45只Wistar雄鼠进行去垂体手术后，有35只大鼠成活，手术成活率77.8％。通过21天的称重观察，发现有15只大鼠手术后两周内日增重不超过1g，判定这些大鼠去垂体完全，手术成功率达到33.3％。为了验证重组牛生长激素的活性，作为对照组的去垂体大鼠注射PBS120μl／只，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组分别注射重组牛生长激素溶液50μg／只、100μg／只和200μg／只，连续注射20天。结果发现低、中、高3个剂量对去垂体大鼠都具有促生长的作用，而且大鼠增重的存在剂量依赖性。对照组大鼠采食量和饮水最少，试验组大鼠采食量和饮水随注射剂量的增大而增大。在最后一次注射后2小时采大鼠血液，检测血样中生长激素浓度发现，生长激素的浓度与注射的剂量相对应，对照组血液中检测不到生长激素，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组血液中的生长激素分别是3.68ng／ml、5.57ng／ml和6.12ng／ml。由此可以断定重组牛生长激素具有促生长活性。为验证重组牛生长激素油混悬制剂体在动物的缓释效果，试验的第1天4个试验组即试验Ⅰ组，试验Ⅱ组，试验Ⅲ组和试验Ⅳ组的去垂体大鼠分别皮下注射药物含量为4.2％重组牛生长激素油混悬长效注射剂0.84mg／只、1.4mg／只、2.8mg／只和4.2mg／只，对照组去垂体大鼠皮下注射PBS溶液120ul／只。每天上午称重1次，连续称重32天并观察大鼠的增重。注射PBS的去垂体大鼠体重相对比较稳定，32天累积增重5.87g，增重6.9％。药物处理32天后试验Ⅰ组，试验Ⅱ组，试验Ⅲ组和试验Ⅳ组的累积增重分别为18.66％、18.97％、20.61％和27.38％。注射31天后试验组大鼠的体重仍有增加的趋势。上述结果表明此种油混悬注射剂在体内至少能缓释31天，其有望发展成为新型长效制剂。随后，将重组牛生长激素的缓释剂型在昆明小鼠上做活性检测实验。分别以1.5mg／只、3mg／只和6mg／只低、中、高3个剂量在小鼠背部皮下注射重组牛生长激素的油混悬长效注射剂，通过称重来观察这种缓释剂型的作用。30天的称重发现，3个试验组的累积增重均高于对照组，分别为34.14％、40.68％、42.52％和44.50％。这种方法虽然能验证生长激素的活性，但不能进行定量的分析，而且也不容易确定油混悬长效注射剂的缓释周期。研究重组牛生长激素油混悬长效注射剂和微球制剂皮下给药后在大鼠体内的药物动力学特征，给药剂量为150ug／只，用放射免疫法(RIA)测定血浆生长激素的水平。结果发现油混悬长效注射剂和微球制剂大鼠的生长效果都高于对照组，而且各试验组大鼠血液中的生长激素水平30天内均在对照之上，这些结果均说明油混悬长效注射剂和微球制剂在体内具有缓慢释药物30天的作用。