一个糖尿病家系肾阴阳两虚证基因表达谱研究

论文摘要

目的:将家系调查方法引入到复杂证候的研究中,精选一个糖尿病家系,研究与糖尿病肾阴阳两虚证相关联的基因表达谱,为证候分子生物学的现代化研究探索一条行之有效的研究道路。 方法:结合国家标准及专家诊断,对一例家系内的糖尿病患者进行肾阴阳两虚证的判定。应用基因芯片技术,分别在3个子家系中将肾阴阳两虚型糖尿病患者与3名家系正常人做基因表达差异显示,并将三张芯片结果进行分析。对相关的临床生化检查进行分析。 结果:在所有芯片结果中共有53条基因上调,有1012条基因下调,下调基因大约是上调的20倍左右。芯片1与2有5条基因共同上调,在1与3,2与3中都没有基因共同上调,芯片1与2中有14条基因共同下调,芯片1与3中有18条基因共同下调,在3张芯片中有10条基因共同表现下调。差异表达基因涉及能量代谢、细胞凋亡、细胞周期等各类,并与免疫、生殖、发育等多种功能基因有关。芯片结果中与代谢相关的差异表达基因占已知功能差异表达基因的20%左右。 结论:(1) 在同一家系中采用病证结合的方法进行基因水平的研究,由于遗传背景相似,生活环境相近,利于排除大量干扰因素,是在现有条件下进行证候分子生物学研究的一种可行方法。(2) 本次实验通过家系研究,比较集中的展示出肾阴阳两虚证基因表达谱研究的发展前景:肾阴阳两虚证的分子生物学基础可能是大规模的基因下调;肾阴阳两虚证与多类基因相关,尤其代谢相关基因可能在肾阴阳两虚证的发生发展中起重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词
• 引言
• 正文
• 1 资料与方法
• 1.1 研究对象
• 1.1.1 研究家族的选择
• 1.1.2 研究对象的诊断标准
• 1.1.2.1 糖尿病西医诊断标准
• 1.1.2.2 正常人标准
• 1.1.2.3 肾阴阳两虚型糖尿病中医辨证标准
• 1.2 实验材料试剂、仪器
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 芯片实验分组
• 1.3.2 临床生化指标及症状得分实验分组
• 1.3.3 标本采集
• 1.3.4 cDNA表达谱芯片
• 1.3.5 芯片的质量标准控制
• 1.3.6 探针制备
• 1.3.7 芯片杂交
• 1.3.8 检测与分析
• 1.4 观察指标
• 1.4.1 差异表达基因
• 1.4.2 临床生化
• 1.5 基因数据分析
• 1.5.1 图像获取
• 1.5.2 检测与分析
• 1.5.3 标准化处理
• 1.5.4 Ratio分析
• 1.5.5 聚类分析
• 1.6 统计方法
• 2 结果
• 2.1 证候家系图
• 2.2 症状得分统计结果
• 2.3 基因表达谱
• 2.3.1 差异基因表达谱
• 2.3.2 Cluster聚类显示
• 2.3.3 差异表达的基因数目初步统计
• 2.3.4 三张芯片共同表达的差异基因
• 2.3.5 芯片1与芯片2共同表达的差异基因
• 2.3.6 芯片1、3共同下调的差异基因
• 2.3.7 芯片2、3共同下调的相关差异基因
• 2.3.8 芯片2中差异表达基因分类
• 2.3.9 芯片3中差异表达基因分类
• 2.3.10 与糖尿病相关的差异表达基因
• 2.4 临床生化指标结果
• 2.4.1 肾功
• 2.4.2 血脂
• 3 讨论
• 3.1 将家系方法引入证候研究的重要意义
• 3.2 肾阴阳两虚证宏观证候研究
• 3.3 肾阴阳两虚证微观差异表达基因分析
• 3.3.1 肾阴阳两虚证与大规模的基因下调
• 3.3.2 肾阴阳两虚证与代谢相关基因
• 3.3.3 肾阴阳两虚证与多类功能基因
• 3.3.4 肾阴阳两虚与糖尿病相关基因
• 3.4 肾阴阳两虚糖尿病生化指标分析
• 结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 综述：肾虚血瘀型糖尿病研究进展
• 参考文献
• 公开发表的学术论文
• 声明