论文题目: 第一部分：重组病毒载体vAc△EGT的构建及其在家蚕中的应用和感染特性 第二部分：兔抗仿蜘蛛拖牵丝蛋白抗体的制备与应用
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 郭廷晴
导师: 陆长德
关键词: 外源基因导入表达载体,增强型绿色荧光蛋白,抗感染,仿蜘蛛拖牵丝蛋白,方法,半定量检测
文献来源: 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
发表年度: 2005
论文摘要: 家蚕是一种能吐丝的经过家养驯化的鳞翅目昆虫,兼具重要的经济价值和学术价值。在昆虫中相对较好的研究基础以及相对简单的饲养条件,也使得家蚕被普遍接受为鳞翅目昆虫的模式生物。然而,与其他研究基础较好的模式生物比如果蝇相比,家蚕的研究仍然落后许多。其重要原因之一是用于家蚕基因功能研究的研究体系和研究手段还比较缺乏,这已经成为深入研究的一种限制。在众多有待完善或开发的研究手段中,可以进行外源基因的成体导入和瞬时表达的基因载体系统是需要的。 本论文第一部分的前半部分展示了重组杆状病毒vAc?EGT 作为外源基因导入表达的载体应用于家蚕成体的可行性。以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)为报告基因,本部分工作证实,通过注射重组病毒vAc?EGT的出芽病毒(Budded virion, BV)到五龄起蚕血淋巴,外源基因能被病毒携带进入家蚕体内的多种组织细胞,实现瞬时高效的表达。vAc?EGT是从苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus, AcNPV)基因组上敲除蜕皮激素UDP糖基转移酶(The ecdysteroid UDP-glucosyltransferase, EGT)基因得到的。EGT基因是AcNPV感染宿主的感染早期表达的非必需基因(Non-essential gene),该基因表达产物能通过糖基化失活宿主昆虫苜蓿银纹夜蛾的蜕皮激素,从而推迟宿主幼虫蜕皮,延长幼虫期。已有研究表明,伴随高滴度的AcNPV病毒注射带来的EGT基因高表达使得家蚕幼虫不能完成变态发育,在蛹期死亡;而敲除了EGT基因的AcNPV注射后,家蚕龄期不变,变态发育正常完成。以EGT缺失的AcNPV病毒vAc?EGT为载体,EGFP报告基因由不同的家蚕启动子控制,在家蚕体内实现了不同类型的表达。
论文目录:
专用名词缩写
中文摘要
英文摘要
第一部分:重组病毒载体vAc?EGT的构建及其在家蚕中的应用和感染特性
引言
材料和方法
实验结果
第一节 缺失EGT基因的AcNPV Bacmid: Ac?EGT
第二节 带有EGFP基因表达框的重组病毒vAc?EGT-EGFPs
第三节 EGFP基因在导入重组病毒vAc?EGT-EGFPs的成体家蚕中表达
第四节 重组病毒vAc?EGT-EGFP对家蚕的感染作用
第五节 重组病毒vAc?EGT-EGFP感染家蚕的有关特性
讨论
小结
参考文献
第二部分:兔抗仿蜘蛛拖牵丝蛋白抗体的制备与应用
引言
材料和方法
实验结果
第一节 仿蜘蛛拖牵丝5600蛋白片段与GST融合表达的质粒构建
第二节 融合蛋白的表达、纯化、酶切及其目标重组产物的鉴定
第三节 抗重组产物5600片段的抗血清制备与应用
讨论
小结
参考文献
全文结论
博士期间发表论文目录
致谢
发布时间: 2005-09-09
参考文献
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标签：外源基因导入表达载体论文; 增强型绿色荧光蛋白论文; 抗感染论文; 仿蜘蛛拖牵丝蛋白论文; 方法论文; 半定量检测论文;