减肥多肽JFT的固相合成及纯化制备工艺研究

论文摘要

随着生活水平的不断提高，肥胖症已成为一种世界性的慢性疾病，并伴随多种并发症，威胁人类健康。人们对体重调节机制认识的深入，使很多新的减肥药物不断研制出来，部分药物已在动物试验中取得较好疗效，有些已深入到分子水平，实验结果也不断地向人类展示着健康瘦身的美好前景，减肥效果明显同时副作用小的减肥药更加受到青睐。本文中的多肽JFT是用肽库技术筛选出的模拟多肽，能增加能量消耗，刺激机体产热而减轻体重，是极具医药价值的多肽，具有良好的市场前景。本研究在于建立JFT多肽的固相合成方法并优化其工艺，降低生产成本。本研究选择以FMOC氨基酸为原料，FMOC Rink-Amide MBHA树脂为载体，首次成功合成了多肽JFT。实验考察了缩合试剂、脱保护试剂、切割试剂等条件对结果的影响，通过封闭残余树脂活性位点和困难氨基酸，引入临时取代基等提高了缩合率，将多肽的氨基酸进行D型取代，从而合成活性更强、稳定性更高的多肽，确定了优化的合成工艺，合成的多肽经MALDI-TOF MS鉴定与其理论分子量一致。使用反相高效液相色谱对粗品进行分离纯化，确定了分离纯化条件，在保证纯度的前提下，提高了产品得率，降低了成本。得到纯度为98.12％的多肽产品，最终收率达到56.4％。此合成纯化工艺操作简单、周期短、合成效率高、成本低、适合于规模化生产。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 生物活性肽概述
• 1.1.1 多肽药物的特点
• 1.1.2 多肽药物现状与发展方向
• 1.1.3 多肽药物的应用情况
• 1.2 减肥药概述
• 1.2.1 肥胖发生的机制
• 1.2.2 减肥药的研究进展
• 1.2.3 减肥药的发展前景
• 1.3 多肽的固相合成
• 1.3.1 固相合成简介
• 1.3.2 固相合成的基本原理
• 1.3.3 合成方法
• 1.3.4 D型氨基酸取代
• 1.4 多肽的分离纯化
• 1.4.1 反相层析
• 1.4.2 凝胶过滤层析
• 1.4.3 离子交换色谱
• 1.5 多肽的监测与分析
• 1.5.1 质谱检测
• 1.5.2 高效液相
• 1.5.3 显色实验
• 1.6 研究意义和内容
• 1.6.1 研究意义
• 1.6.2 研究内容
• 第二章 多肽的固相合成
• 2.1 固相合成的工艺设计
• 2.1.1 仪器及设备
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 多肽合成装置简图
• 2.1.4 多肽的合成流程
• 2.1.5 以Rink amide-MBHA Resin为载体合成多肽
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 载体树脂的选择
• 2.2.2 反应柱的前处理
• 2.2.3 树脂的溶缩
• 2.2.4 不同偶联率测定方法的比较
• 2.2.5 树脂的封闭
• 2.2.6 困难氨基酸的封闭
• 2.2.7 脱保护策略的选择
• 2.2.8 缩合试剂的选择
• 2.2.9 肽链酰胺N的临时取代
• 2.2.10 切割试剂的选择
• 2.2.11 粗肽的MS鉴定
• 2.3 小结
• 第三章 多肽的纯化与制备
• 3.1 前言
• 3.2 仪器及试剂
• 3.2.1 仪器
• 3.2.2 试剂
• 3.2.3 粗肽的RP-HPLC分析
• 3.2.4 HPLC条件优化
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 粗肽RP-HPLC分析
• 3.3.2 HPLC条件的优化
• 3.4 小结
• 第四章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 展望
• 参考文献
• 致谢