论文摘要
研究背景:在后基因组时代,人类基因组计划的工作重点转移到对功能基因的研究,随着差异基因筛选技术的不断完善,对疾病的发生机制的研究也不断深入,基因芯片技术是近年来兴起的一种分子生物学技术。该技术在医学界引起了广泛的关注,在诊治高血压及其并发症的研究中应用也较多,具有广泛的应用前景。基因表达谱芯片是一种高通量,快速的检测基因表达量的手段,本研究利用这种新兴技术来研究高血压血瘀证与非血瘀证患者内皮细胞中基因表达的变化及意义。真核细胞骨架由三种基本纤维和上百种纤维结合蛋白组成。除了保持细胞形状、分隔固定细胞内部结构和参与构成某些细胞器外,真核细胞骨架还具有物质运输、信号传递、参与细胞运动、分化、增殖以及调节基因表达等作用。既然细胞骨架功能如此多样,那么它的变化必然会从多方面影响细胞行为。细胞骨架对疾病变化相当敏感,对微丝有破坏作用,进而影响了细胞生长、分裂、信号传导、新陈代谢等过程。本实验进行了高血压血瘀证与非血瘀证患者和健康人细胞骨架微丝的比较。探讨高血压血瘀证与非血瘀证时细胞骨架变化和正常对照组之间的差异。研究方法:实验样品随机分为3组:高血压血瘀证组,高血压非血瘀证组:正常对照组。应用基因芯片技术,得出了高血压血瘀证与非血瘀证患者和健康人（正常对照组）内皮细胞中基因表达的变化情况,分析基因表达差异。总RNA逆转录合成Cy5/Cy3标记的cDNA,混合后杂交含8000个人类基因的高密度基因芯片,经过洗片和扫描,获得荧光信号图像并用计算机分析,按差异显著性标准,从8000条基因中筛选出差异表达基因。主要包括细胞周期蛋白,细胞凋亡,细胞骨架和运动蛋白等相关基因。并以用免疫荧光染色法标记,激光共聚焦荧光显微镜观察形态并拍照。细胞肌动蛋白表达定量分析。本实验用鬼笔环肽进行肌动蛋白微丝（F-actin）染色,在共聚焦激光显微镜下观察,荧光值分析。研究结果:高血压血瘀证组表现出一些基因的上调或下调。高血压血瘀证组存在细胞骨架的急剧变化和F-actin含量降低。细胞的排列方向发生改变,细胞内的肌动蛋白排列同细胞的方向一致,肌动蛋白发生部分的断裂,肌动蛋白的荧光强度同正常对照组相比明显减弱。结论:高血压血瘀证血清造成内皮细胞基因表达谱的显著差异,这为揭示血瘀证复杂的病变机理提供了新研究的方向。微丝是细胞骨架的主要组成成分,在细胞生命活动中起着重要作用,细胞骨架微丝观察的定量与定性分析是血瘀证实质研究的良好切入点,血瘀证现代研究应积极引进微观结构学和基因科学的最新成果,为临床治疗学提供分子生物学依据。
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- [2].“老人多瘀”理论浅析[J]. 上海中医药大学学报 2010(04)
标签：高血压病论文; 血瘀证论文; 基因芯片论文; 细胞骨架微丝论文; 激光共聚焦荧光显微镜论文;