白草花叶病毒变异的初步研究

论文摘要

本实验对来自山西忻州的一些表现病毒病症状的白草、高粱和玉米材料（共15个样品）采用生物学,血清学和分子生物学等方法和技术进行了检测和序列的分析、比对。 利用多种植物病毒的抗血清对全部标样进行ELISA检测,结果表明15个样品都与白草花叶病毒的抗血清反应。其中10号样品既与白草花叶病毒（PenMV）的抗血清反应,还与甘蔗花叶病毒北京分离物（SCMV -BJ）的抗血清呈阳性反应。使用SCMV-BJ特异性的引物从10号样品中扩增出约700bp的片段。包括3′-NTR和CP基因的C末端。所得的核苷酸序列与SCMV-BJ的同源性达到99.28%。所得CP的C末端其氨基酸序列与SCMV-BJ的同源性达100%。结合血清学结果,得出结论:10号样品中同时含有两种病毒,属于混合侵染。 利用白草花叶病毒特异性引物扩增这15个分离物的外壳蛋白基因序列。序列分析表明,15个样品的外壳蛋白基因均为909个核苷酸（含终止密码子）,编码302个氨基酸。这15个样品再加上已知的PenMV-A,PenMV-B,PenMV-C三个分离物两两比对的核苷酸序列同源性在91.1%-100%,其中1号,4号,10号,15号的同源性为100%,11号和13号同源性也为100%,;氨基酸序列同源性在97.7%～100%。15个分离物均含有PenMV。 通过比对这15个样品的外壳蛋白基因序列,可知15个样品中只有2号和14号与蚜传密切相关的保守基序为DAG,其余均突变为DTG。 克隆了9号、13号和15号样品的HC-Pro的部分序列,与蚜传相关的基序没有发生突变。紧接着做了1号,2号,7号,9号,13号,14号,15号7个样品的蚜传实验,其中13号不能蚜传,1号、7号、9号、15号蚜传活性降低。结合前面的序列比对得出结论,DAG基序突变为DTG能使病毒的蚜传活性大大降低,甚至丧失。

论文目录

• 第一章 前言
• 1.1 白草花叶病的研究进展
• 1.2 马铃薯Y病毒属基因组结构与功能
• 1.3 马铃薯Y病毒属病毒和传播介体的互作关系
• 1.3.1 蚜传辅助因子的发现
• 1.3.2 对于蚜传相关基序的研究
• 1.3.3 对于HC-Pro和CP中其他与蚜传相关位点的研究
• 1.3.4 小结
• 1.4 本实验的研究目的和意义
• 第二章 白草花叶病毒山西分离物CP基因序列的测定
• 2.1 材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 菌株和质粒
• 2.1.3 生化及分子生物学试剂
• 2.1.4 寡聚核苷酸引物
• 2.2 方法
• 2.2.1 ACP-ELISA
• 2.2.2 植物总RNA的提取
• 2.2.3 RT-PCR
• 2.2.4 PCR产物的纯化
• 2.2.5 连接反应
• 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备
• 2.2.7 连接产物转化大肠杆菌
• 2.2.8 碱裂解法提取质粒DNA
• 2.2.9 验证
• 2.2.10 序列分析
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 血清学实验
• 2.3.2 PCR扩增结果
• 第三章 白草花叶病毒HC-PRO基因部分序列的测定和病毒的蚜传实验
• 3.1 材料
• 3.1.1 菌株和质粒
• 3.1.2 生化及分子生物学试剂
• 3.1.3 寡聚核苷酸引物
• 3.1.4 蚜虫
• 3.2 方法
• 3.2.1 RT-PCR
• 3.2.2 HC-Pro基因的克隆
• 3.2.3 蚜传实验
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 HC-Pro克隆结果
• 3.3.2 蚜传实验结果
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介