论文摘要
目的建立一个稳定、可重复性强，与人类骨癌痛高度相似的小鼠骨癌痛模型，探讨NR1与NOS在癌性痛产生和维持中的作用。方法实验第一部分小鼠骨癌痛模型的制备及评价：选用体重约18-20g的成年雄性C57BL／6小鼠30只，随机分为四组，模型组（15只）：接种Lewis肺癌细胞2×106个；热灭活组（5只）：接种相同数目加热灭活的Lewis肺癌细胞；PBS组（5只）：接种等容积的PBS液；正常对照组（5只）：不予任何处理。接种容积均为10ul。术后7天始隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械性触诱发痛。术后第7、15、23天，将小鼠麻醉后行双侧后肢X线摄片，评估肿瘤诱发的骨组织破坏程度。模型组小鼠每次摄片后任选5只取术侧后肢，各对照组小鼠最后一次摄片后取术侧后肢，分别作苏木素-伊红（HE）染色观察骨质破坏情况。实验第二部分NR1和NOS在骨癌痛小鼠脊髓背角中的表达及意义：在实验第一部分成功建立小鼠骨癌痛模型的基础上，另选体重约18-20g的雄性C57BL／6小鼠30只随机分为A组（模型组）接种Lewis肺癌细胞2×106个，B组（对照组）接种等容积的PBS液，C组（空白对照组）不予任何处理，每组10只，接种容积均为10ul。按照实验第一部分的方法建立骨癌痛模型，于建模后第23天取腰段脊髓行NR1免疫组化检测和NOS测定。结果1)实验组接种后第11天左右出现明显自发痛行为，表现为自发抬足时间延长；接种后第13天左右出现明显的触诱发痛，表现为50％缩足阈值明显下降，且持续整个观察期。接种后第23天放射学结果显示，术侧股骨下段骨髓腔消失，骨皮质中断、大块缺损。同时组织学可见肿瘤细胞充满骨髓腔，且穿破骨皮质向外生长，侵犯周围肌肉组织。行为学、放射学、组织学三方面证实建模成功。2)脊髓NR1免疫组化检查和NOS测定结果：模型组NR1染色实际灰度与IOD值分别为95.400±6.076、11.383±2.277，对照组分别为58.257±9.781、6.283±1.900，空白对照组分别为52.689±10.290、5.972±1.352，分别与空白对照组和对照组相比均有显著差异（P＜0.05）；而对照组与空白对照组相比无统计学意义（P＞0.05）；脊髓NOS测定，模型组为2.842±0.663，对照组为1.770±0.149，空白对照组1.445±0.134，模型组与空白对照组以及对照组相比均有显著差异（P＜0.05）；而对照组与空白对照组相比无统计学意义（P＞0.05）。结论C57BL／6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞能成功制备小鼠骨癌痛模型，此模型与人类骨癌痛高度相似。同时，骨癌痛小鼠脊髓背角NR1与NOS表达增高，说明脊髓NR1及NOS可能在骨癌痛形成中起重要作用。