枇杷小种子植株遗传多样性的RAPD分析

论文摘要

本研究采用RAPD技术对100份枇杷小种子植株个体材料、1份母株材料以及1份母株砧木材料进行变异性和遗传多样性分析。首先对枇杷基因组DNA的提取方法进行了改良,以获得高质量的基因组DNA,用于RAPD分析。然后对枇杷RAPD反应体系体系进行优化,建立最佳RAPD扩增体系,筛选出适合枇杷RAPD分析的随机引物并进行PCR扩增。对样品的RAPD图谱及数据进行统计分析。研究结果如下:（1）本试验采用改良CTAB法,成功地从新鲜和硅胶保存的枇杷嫩叶中提取DNA,产率较高,OD260/OD280为1.80—2.05范围内,符合RAPD分析的要求。通过琼脂糖凝胶电泳分析,提取的DNA质量高,完整性好。（2）优化了枇杷RAPD最佳反应体系:PCR扩增的总体积为25μL,包括50ng的模板DNA,10×PCR buffer 2.5μL,2.0mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTP,0.3μmol/L引物,Taq酶1.2U。扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性1min,38℃退火1.5min,72℃2min,45个循环后在72℃延伸10 min,结束后在4℃条件下保存。最后用2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。（3）采用优化后的反应体系对120个引物进行筛选,经过三次重复,筛选出多态性和扩增重复性好、谱带清晰且较多的9个引物。（4）利用9个筛选出的RAPD引物对枇杷小种子植株群体、母株及其砧木材料进行扩增,研究群体的遗传多样性。共产生100条谱带,其中83条为多态性带,占83%,平均每个引物扩增的DNA带数为11.11条,多态性带9.22条。根据扩增结果建立了个体间亲缘关系的UPGMA聚类图,将102份单株划分为5大类。（5）通过POPGENE32 1.32软件的分析,获得了枇杷小种子植株群体Nei基因多样度指数和Shannon多样性信息含量指数。枇杷小种子植株群体内遗传多样性较高,同时,存在大量的变异单株,为枇杷选育种提供了丰富的原材料,为后续研究奠定了基础。（6）分析了枇杷小种子植株材料的分子性状,发现多份单株具有各自的特异性谱带,4号在s273-250、34号在s22-600、49号在s285-900、61号在s1002-200、63号在s22-250、75号在s1002-600、88号在s22-1400处分别有各自的特异分子标记。可作为这些单株今后成为新品种或株系的分子指纹标记。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 枇杷育种
• 1.1.1 引种
• 1.1.2 实生选种
• 1.1.3 杂交育种
• 1.1.4 诱变育种
• 1.1.5 生物技术在枇杷育种的应用
• 1.2 枇杷遗传多样性
• 1.2.1 枇杷形态学标记和孢粉学标记的遗传多样性
• 1.2.2 枇杷细胞学标记的遗传多样性
• 1.2.3 枇杷同功酶标记的遗传多样性
• 1.2.4 枇杷RAPD标记的遗传多样性
• 2 本研究的目的与意义
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.2 试剂
• 3.3 主要仪器
• 3.4 枇杷基因组DNA的提取与检测
• 3.5 RAPD扩增反应参数的优化
• 3.6 引物的选择
• 3.6.1 随机引物的筛选
• 3.6.2 PCR扩增及电泳检测
• 3.6.3 数据整理与统计分析
• 4. 结果与分析
• 4.1 提取枇杷基因组DNA的质量评估
• 4.2 RAPD优化反应体系的建立
• 2+浓度对RAPD扩增结果的影响'>4.2.1 Mg²⁺浓度对RAPD扩增结果的影响
• 4.2.2 Taq酶浓度对RAPD扩赠结果的影响
• 4.2.3 引物浓度对RAPD扩增效果的影响
• 4.2.4 dNTPs浓度对RAPD扩增效果的影响
• 4.2.5 模板DNA浓度对RAPD扩增效果的影响
• 4.2.6 优化后的体系
• 4.3 引物的筛选
• 4.4 枇杷小种子植株的RAPD产物多态性和遗传多样性
• 4.5 枇杷小种子植株的RAPD特异标记
• 4.6 枇杷小种子植株个体间的相似系数
• 4.7 枇杷小种子植株群体的亲缘关系树状图
• 5. 讨论
• 5.1 枇杷基因组DNA的提取
• 5.2 枇杷RAPD反应体系
• 5.3 RAPD技术在枇杷小种子植株遗传多样性研究中的应用
• 5.4 枇杷小种子植株群体的变异与遗传多样性
• 5.5 枇杷小种子育种途径的可行性分析
• 6 小结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 附录