交沙霉素的分离纯化工艺研究

论文摘要

交沙霉素（josamycin）是属于十六元大环内酯类抗生药物,它是一种广谱抗菌素,其抗菌谱与红霉素相似,但是副作用较小且不易使病菌产生抗药性。本课题的主要内容是研究交沙霉素的分离提取和纯化工艺。主要取得了一下成果:首先,建立了关于交沙霉素的分析检测方法,包括生物测定法和高效液相色谱法。其中高效液相色谱法具有快速、准确等特点,适用于测定发酵液及各个分离环节中的含量。通过改变流动相的比例,缓冲液的浓度和酸碱度,经过优化后的色谱条件是:色谱柱用碳十八烷基硅胶键合柱;流动相是甲醇和磷酸缓冲液,其比例是80:20;检测波长是232nm;流速是1ml/min;进样量是10ul;柱温是室温。在上述条件下交沙霉素的保留时间为6.412min,与其他杂质峰的分离度大于1.5。在大孔树脂吸附分离法的研究中,从几种常用的大孔树脂中筛选出了XAD-16树脂为吸附剂,优化后的吸附条件为:吸附流速为0.5ml/min;pH为10;加入1%的氯化钠的盐浓度。解吸的时用乙醇为解吸剂,优化后的洗脱条件:70%和100%两种浓度的乙醇为洗脱剂,采用梯度洗脱的方式,先用70%的乙醇洗脱,大量的杂质及色素被洗脱;然后用100%的乙醇将有效成分洗脱下来。在溶媒萃取法提取的试验中,由于交沙霉素在发酵液中大部分存在于菌丝体中,所以试验中将发酵液调pH值到9,然后离心分离,将菌丝体与轻质碳酸钙粉末以质量比为1:1的比例混合均匀,在真空干燥箱中50℃条件下干燥6小时。将干燥的菌丝体均匀粉碎大小颗粒为20目。干燥菌丝体颗粒用95%浸提乙醇,通过设计正交试验得到用95%乙醇浸提干燥菌丝体颗粒的最优条件是:每10克干燥菌丝体用20毫升95%乙醇;浸提时间为36小时;浸提温度为室温;浸提次数为3次。在交沙霉素的精制阶段,用200-300目的层析硅胶装柱,用氯仿:甲醇=2:3比例配制的洗脱液进行洗脱,收集洗脱液后在旋转蒸发器中浓缩（真空度为0.095Mpa,温度为50℃）。浓缩液挥干后得到黄色粉末状的交沙霉素,然后用pH3.5的酸化水溶解该粉末。将交沙霉素的酸化水溶液调pH到9后,静止20-30分钟,便有淡黄色的交沙霉素晶体析出。通过对交沙霉素晶体的室内生物活性测定,所得晶体的活性略小于购买标准品。的活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1.前言
• 1.1 交沙霉素的基本性质概述
• 1.1.1 交沙霉素理化性质
• 1.1.2 交沙霉素的抗菌活性和特点
• 1.1.3 交沙霉素的作用机理
• 1.1.4 交沙霉素的生物合成和化学改造
• 1.2 抗生素的一般分离纯化方法
• 1.2.1 溶媒萃取法
• 1.2.2 吸附法
• 1.2.3 离子交换法
• 1.2.4 沉淀法
• 1.3 抗生素的分离纯化新技术进展
• 1.3.1 双水相技术在抗生素分离纯化的应用
• 1.3.2 膜技术在抗生素分离纯化的应用
• 1.4 大环内酯类抗生素的分离方法
• 1.4.1 霉素类抗生素的分析方法
• 1.4.2 其它大环内酯类抗生素分离分析方法
• 1.4.3 交沙霉素的分离分析方法
• 1.5 本文的立题背景及意义
• 1.5.1 立题背景
• 1.5.2 题意义
• 2.材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 试验仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 交沙霉素定量分析方法
• 2.2.2 色谱条件优化
• 2.2.3 发酵液浸提及理化性质的研究
• 2.2.4 发酵液预处理
• 2.2.5 菌丝体浸提
• 2.2.6.发酵液上清液的萃取
• 2.2.7 大孔树脂吸附处理法及树脂筛选
• 2.2.8 柱层析分离试验
• 2.2.9 交沙霉素精制品制备
• 2.3 数据处理方法
• 3.结果与讨论
• 3.1 交沙霉素的检测方法
• 3.1.1 薄层层析
• 3.1.2 生物测定方法
• 3.1.3 HPLC方法的建立
• 3.2 发酵液及其预处理研究
• 3.2.1 浸提溶剂的选择
• 3.2.2 交沙霉素在发酵液中的分布情况
• 3.2.3 发酵液在酸碱环境中的稳定性研究
• 3.2.4 发酵液的温度稳定性试验
• 3.2.5 发酵液的离心处理
• 2（SO₄）₃絮凝处理'>3.2.6 Al₂（SO₄）₃絮凝处理
• 3.3 大孔树脂法分离结果
• 3.3.1 静态吸附试验
• 3.3.2 XAD-16的吸附动力研究
• 3.3.3 吸附条件的优化
• 3.3.4 解吸剂的选择
• 3.3.5 树脂再生
• 3.3.6 大孔树脂放大试验（10倍）
• 3.4 溶媒萃取研究
• 3.4.1 溶剂浸提菌丝体的体积选择
• 3.4.2 浸提时间的选择
• 3.4.3 浸提次数选择
• 3.4.4 浸提温度的选择
• 3.4.5 浸提过程的优化（正交设计）
• 3.4.6 浸提液的浓缩
• 3.4.7 浓缩液的溶剂萃取
• 3.5 交沙霉素的精制
• 3.5.1 脱色
• 3.5.2 柱层析
• 3.5.3 结晶
• 3.6 交沙霉素生物活性测定
• 4.小结与讨论
• 参考文献
• 致谢