孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制研究

论文摘要

目的：探索孤啡肽（OFQ）联合阿霉素（ADM）逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及与MDR1mRNA和P-糖蛋白（P-gp）表达的相关性。方法：MTT检测OFQ、ADM细胞毒性及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响；流式细胞术检测细胞凋亡率；实时荧光定量PCR检测MDR1mRNA表达水平；蛋白印迹检测P-gp的相对表达量。结果：1、K562/ADM细胞经不同浓度ADM（5-40μg/mL）及OFQ（10-5-10-9mol/l）单独作用后,出现不同程度抑制,依据浓度-抑制率曲线,本实验选用非细胞毒性剂量的OFQ（10-7mol/l）及72小时IC50为21μg/ml ADM（15μg/ml）作为最佳作用浓度。2、OFQ联合ADM后对耐药细胞生长抑制作用较ADM单独作用更为显著,与ADM组比较,48小时具有统计学意义（P<0.05）。ADM单独用药时12、24、48、72小时耐药细胞的增殖抑制率（IR）分别为17.2%、19.5%、22.4%、32.3%,OFQ联合ADM后IR分别为18.7%、22.4%、34.1%、35.8%,耐药逆转倍数（RI）分别为1.09、1.15、1.52、1.11倍,48小时内随作用时间延长而增强（r=0.97）,48小时耐药逆转作用达到最强；3、FCM结果显示OFQ联合ADM后,K562/ADM细胞凋亡百分率显著提高（P<0.01）。12、24、48、72小时细胞R1分别为：18.91、10.84、6.76和1.61；4、RT-qPCR结果显示,与ADM单独用药组比较,ADM联合OFQ后K562/ADM细胞的MDR1mRNA相对表达量明显下降（P<0.01）。48小时内OFQ+ADM组K562/ADM细胞的MDR1mRNA表达水平随作用时间的延长而降低（r=0.91）,48小时达到最低；5、Western blot结果显示：OFQ联合ADM后P-gp蛋白的相对表达量降低,与ADM组比较具有统计学意义（P<0.01）。OFQ联合ADM逆转K562/ADM细胞耐药性的逆转倍数（RI）分别为：1.261、1.517、3.382、2.103,48小时内随作用时间延长而增加（r=0.98）。结论：1、OFQ联合ADM可时间依赖性逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48小时为最佳逆转时间。2、OFQ联合ADM逆转K562/ADM细胞多药耐药机制与下调MDR1mRNA和P-gp表达相关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 英文縮写词与对照
• 综述
• 参考文献
• 在学期间硏究成果
• 致谢