乳杆菌多相鉴定体系建立

论文摘要

乳杆菌是常见的益生菌，是重要的工业微生物资源，但针对乳杆菌属细菌，至今没有统一检测标准和鉴定方法。实验采用生理生化方法、16S rRNA基因序列分析方法和Biolog微生物自动分析系统方法对来源于世界权威保藏机构的5株干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、5株类干酪乳杆菌类干酪亚种(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei)及5株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)，共15株进行复核鉴定，以探讨上述鉴定方法对这3种乳杆菌属细菌的鉴定效果。实验结果显示应用生理生化方法不易将15株供试乳杆菌菌株区分开，且操作繁琐，实验周期较长，生理生化实验结果可为菌株的鉴定提供数据参考；16SrRNA基因序列分析方法可将这15株乳杆菌的鉴定到属，并进一步鉴定到干酪乳杆菌群，由于供试乳杆菌菌株基因具有较高同源性，故无法准确鉴定到种；Biolog微生物自动分析系统对上述15株乳杆菌可以给出较好的鉴定结果，能够快速反应出各乳杆菌株对95种碳源的利用情况；构建Biolog系统发育树，能够准确分析菌株属的分类学地位，但该系统对这3种乳杆菌鉴定的普遍适用性仍需要大量实验数据的支持。实验采用的三种鉴定方法，在不同的水平上显示出各自特有的鉴定效果，通过多项鉴定方法建立针对这3种乳杆菌属细菌的多相鉴定体系具有可行性，并对乳杆菌属其它种的鉴定，提供了一定的技术路线和理论指导，也可为当前日益普及的乳杆菌制品的质量控制提供必要的手段。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 引言
• 1.1 概述
• 1.2 益生菌资源背景
• 1.2.1 益生菌概念的变更
• 1.2.2 益生菌的种类及益生性功能
• 1.2.3 乳杆菌作为益生菌的应用
• 1.3 乳杆菌属的分类及鉴定方法
• 1.3.1 乳杆菌属的特征
• 1.3.2 乳杆菌属的分类
• 1.3.3 乳杆菌属的鉴定方法
• 1.4 Biolog微生物自动分析系统在微生物分析鉴定中的应用
• 1.4.1 Biolog微生物自动分析系统的介绍
• 1.4.2 Biolog微生物自动分析系统在细菌鉴定中应用
• 1.5 研究方案
• 1.5.1 供试乳杆菌菌株种的选择
• 1.6.2 生理生化实验方法对供试乳杆菌菌株的鉴定
• 1.6.3 16S rRNA基因序列分析供试乳杆菌菌株
• 1.6.4 应用Biolog微生物自动分析系统对供试乳杆菌菌株的鉴定
• 1.6.5 探讨针对3种乳杆菌多相鉴定方法体系的建立
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 供试乳杆菌菌株
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 实验耗材及仪器
• 2.2 供试乳杆菌菌株的活化与纯化
• 2.2.1 供试乳杆菌菌株的活化
• 2.2.2 供试乳杆菌菌株纯化和富集培养
• 2.3 传统方法鉴定供试乳杆菌菌株
• 2.3.1 菌落特征及菌体形态
• 2.3.2 接触酶测定
• 2.3.3 明胶液化实验
• 2.3.4 硝酸盐还原实验
• 2.3.5 糖、醇类发酵实验
• 2.4 16S rRNA基因序列测定及系统发育分析
• 2.4.1 DNA的提取
• 2.4.2 供试乳杆菌菌株的16S rRNA基因序列的扩增
• 2.4.3 序列测定
• 2.4.4 系统发育树的建立
• 2.5 Biolog微生物自动分析系统鉴定
• 2.5.1 菌株富集培养
• 2.5.2 浊度调整
• 2.5.3 菌悬液制备
• 2.5.4 接种鉴定微平板
• 2.5.5 微平板培养
• 2.5.6 读取数据
• 2.6 验证实验
• 第3章 结果与讨论
• 3.1 生理生化指标的测定
• 3.2 16S rRNA基因序列测定及系统发育分析
• 3.3 Biolog微生物自动分析系统鉴定
• 3.4 供试乳杆菌菌株碳源利用测定
• 3.5 讨论
• 3.5.1 生理生化实验方法及16S rRNA基因序列分析方法对供试乳杆菌菌株的鉴定
• 3.5.2 Biolog微生物自动分析系统对供试乳杆菌菌株鉴定结果的探讨
• 3.5.3 Biolog微生物自动分析系统碳源利用数据探讨
• 3.5.4 3种常见乳杆菌多相鉴定体系的建立
• 第4章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 附录 厌氧菌接种液（AN-IF）的制备
• 攻读学位期间的研究成果