中药复方JH-07的HPLC指纹图谱及抗肿瘤活性研究

论文摘要

复方JH-07是我室自行研制的中药复方,由黄连、吴茱萸、藤黄的醇提物按质量比1.5:1.5:1复配而成,经初步药理学试验具有一定抗肿瘤活性。中药质量评价是当前中医药领域的热点问题,也是中药现代化的重要研究课题,其中指纹图谱是公认的解决中药质量控制的方法。本课题选择HPLC指纹图谱分析方法为主,对复方进行质量控制研究;选择体内、外抗肿瘤作用作为评价指标。主要内容如下:采用HPLC法对各药材醇提物中指标性成分进行含量测定,从而起到在源头上控制复方质量的作用。黄连中小檗碱含量为74.5mg·g-1,吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量分别为78.6及46.5mg·g-1,藤黄中藤黄酸含量为26.2 mg·g-1。采用HPLC指纹图谱对复方JH-07的质量进行控制。经过多次摸索,确定洗脱系统:水-乙腈-50mmol·L-1KH2PO4,水溶液（磷酸调PH到3）,线性梯度洗脱;检测波长:283nm;柱温:25℃;流速:1.0ml·min-1。建立了复方JH-07指纹图谱分析方法。选出各批次复方JH-07的20个色谱峰作为共有指纹峰,比较了保留时间、峰面积、峰面积百分比及指标性成分含量的一致性。发现这些指纹峰特征性强、系统性好,可以很好的反映复方JH-07质量优劣。生物活性实验部分采用体外、体内抗肿瘤实验方法。体外抗肿瘤实验采用噻唑蓝（MTT）法俭测JH-07对体外培养的人食管癌细胞EC9706,人白血病细胞K562敏感株及耐药株,人成纤维瘤细胞L929,人脑胶质瘤细胞TJ-905的生长抑制作用。体外JH-07可以显著抑制人白血病细胞K562敏感株和耐药株,以及人脑胶质瘤细胞TJ-905的生长,IC50分别为15.40μg·ml-1、9.55μg·mL-1、15.02μg·mL-1。体内JH-07对H22肝癌荷瘤小鼠实体瘤的抑瘤实验采用常规抗肿瘤药物实验方法,用昆明种小白鼠,雌雄各半,设立空白对照组、顺铂(0.005g·kg-1)及3个剂量JH-07给药组,每组10只;比较各组瘤重、肝、脾、胸腺指数,计算抑瘤率。体内JH-07小剂量、中剂量、高剂量组的肿瘤抑制率分别为48.7%、36.5%、46.7%。与对照组相比,P均＜0.01。脏器指数及重量与空白对照组相比较差异均无统计学意义（P＞0.05）,而与阳性对照药顺铂组比较其差异具有统计学意义（P＜0.01）。表明JH-07体外、体内对肿瘤细胞及组织均有显著抑制生长活性,是值得深入研究的抗肿瘤新复方。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 复方指纹图谱的研究概况
• 1.2 复方抗肿瘤的研究概况
• 1.3 立题依据
• 第二章 仪器、试剂和药品
• 仪器
• 试剂
• 药品
• 第三章 复方JH-07中各单味药的提取
• 3.1 黄连、吴茱萸、藤黄提取工艺
• 3.2 复方JH-07各单味药材中指标性成分的含量测定
• 3.3 药材提取及指标性成分含量
• 3.4 小结
• 第四章 复方JH-07的HPLC色谱条件的优化
• 4.1 流动相条件选择
• 4.2 梯度洗脱条件选择
• 4.3 检测波长选择
• 4.4 小结
• 第五章 复方JH-07指纹图谱的建立和辨识
• 5.1 对照品图谱建立
• 5.2 复方JH-07的指纹图谱建立
• 5.3 指标性成分含量计算
• 5.4 复方JH-07指纹图谱相似性
• 5.5 小结
• 第六章 复方JH-07药理研究
• 6.1 复方JH-07体外抗肿瘤活性研究
• 6.2 复方JH-07体内抗肿瘤活性研究
• 第七章 总结与展望
• 总结
• 展望
• 参考文献
• 综述
• 致谢