导读:本文包含了甲基结合蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:DNA甲基转移酶,甲基化CpG结合蛋白,泛发性脓疱型银屑病
甲基结合蛋白论文文献综述
朱腾,晋红中[1]（2019）在《泛发性脓疱型银屑病患者外周血单个核细胞甲基化酶及甲基化CpG结合蛋白mRNA的表达水平》一文中研究指出目的观察泛发性脓疱型银屑病(generalized pustular psoriasis,GPP)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNA甲基转移酶及甲基化CpG结合蛋白(methyl-CpG binding protein,MeCP) mRNA的表达情况,初步探讨DNA甲基化在GPP中可能的作用机制。方法回顾性收集2015年12月至2016年12月在北京协和医院皮肤科门诊或住院治疗的9例GPP患者临床资料;随机选取10例同期在医院接受健康体检的健康人做为对照,年龄和性别与GPP患者相匹配。分别留取10 ml肘正中静脉血,采用密度梯度离心法分离PBMC,应用Trizol法提取PBMC总RNA,采用实时PCR法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4及MeCP2的mRNA表达水平,并分析年龄及病情严重程度与mRNA表达水平的相关性。结果 GPP患者PBMC中DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD4的mRNA表达水平较健康对照组升高[DNMT3a:0. 000 17 (0. 000 06,0. 001 15)比0. 000 03(0. 000 02,0. 000 04); DNMT3b:0. 000 04±0. 000 02比0. 000 02±0. 000 01; MBD1:为0. 001 01±0. 000 45比0. 000 46±0. 000 15; MBD2:0. 002 61±0. 000 39比0. 001 85±0. 000 52; MBD4:0. 004 29±0. 001 60比0. 001 57±0. 000 55,P均<0. 05],年龄及疾病严重度与上述因子mRNA的相对表达水平无相关性(P均>0. 05)。结论 GPP患者体内甲基化相关调控基因表达异常,但与年龄和疾病严重程度不相关。(本文来源于《协和医学杂志》期刊2019年04期）
张鹏,杨红兰,刘含,周艳华,杨燕[2]（2019）在《甲基结合蛋白1对小鼠胚胎干细胞增殖及克隆形态的影响》一文中研究指出目的:研究甲基结合蛋白1(Mbd1)对小鼠胚胎干细胞克隆形态及增殖的影响。方法:设计针对Mbd1转录起始位点的gRNA,将表达有gRNA和Cas9蛋白的质粒使用脂质体转染方法转入小鼠胚胎干细胞(J1);使用抗生素将未转染成功的细胞杀死后,细胞继续培养7 d,挑取单克隆细胞,采用PCR法筛选敲除Mbd1的纯合子细胞,观察Mbd1缺失对小鼠胚胎干细胞克隆形态的影响;使用细胞计数法检验Mbd1对胚胎干细胞增殖的影响。结果:通过Cripsr/Cas9成功获得敲除Mbd1的胚胎干细胞,Mbd1缺失后的小鼠胚胎干细胞丧失了常规小鼠胚胎干细胞的3D克隆形态,细胞呈现单层扁平克隆;Mbd1缺失后小鼠胚胎干细胞增殖速率变慢。结论:Mbd1通过影响小鼠胚胎干细胞克隆形态和增殖而影响胚胎干细胞的多能性。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2019年06期）
王欣,赵丰,李丽君[3]（2019）在《碳水化合物反应元件结合蛋白基因启动子甲基化与2型糖尿病的相关性研究》一文中研究指出目的:针对2型糖尿病(T2DM)患者单核细胞之中糖类反应组件结合蛋白(ChREBP)进行分析,确定其基因启动子范围的甲基化程度,并分析其与T2DM之间的相关性。方法:空腹抽取研究目标的静脉血液,肝素进行处理,分析测试机检测其在空腹状态下的生化指标,通过针对甲基化的PCR亚硫酸氢盐限制性内切酶法(BSP)考察ChREBP的启动子甲基化程度均值。结果:T2DM组病人ChREBP基因启动子的甲基化程度均值在P<0.05的条件下较对照组更高;对于实验组,其ChREBP基因之中的8个CpG位点和对照组相比拥有更高的甲基化程度,且在P<0.01的条件下存在统计学上的显着差别。结论:2型糖尿病病人具有更高的ChREBP基因启动子甲基化程度,所以本研究针对ChREBP基因进行分析,考察其启动子CpG位点的甲基化程度,结果显示,该甲基化程度的不正常可能和糖尿病存在一定的相关性。(本文来源于《内蒙古医科大学学报》期刊2019年03期）
张赟恺[4]（2019）在《组蛋白去甲基化酶Kdm5b和RNA结合蛋白Rbm25在免疫炎症中的作用和机制研究》一文中研究指出炎症反应是机体应对外来病原体或内部组织细胞受损等不利因素的应激生命过程,是机体清除有害刺激和启动治愈过程的应对措施。炎症反应根据其作用的特点和方式,分为急性炎症反应和慢性炎症反应。前者在病原体急性感染或机体组织损伤的早期发生,而后者指持续的、相对低水平的炎症反应,由多种细胞参与,表现为组织破坏和修复的同时发生,可由急性炎症反应转化而来。炎症反应是多种疾病如病原体感染和自身免疫性疾病的共同病理过程,其失调影响疾病的进程和转归。巨噬细胞和树突状细胞作为重要的天然免疫细胞,分泌多种细胞因子,能够快速的触发天然免疫应答,介导急性和慢性炎症反应。天然免疫细胞活化不足,机体便不能有效的抵抗外界病原体,而过度或持续激活则会引发过强的炎症反应或慢性炎症迁延,导致一系列免疫病理损伤和自身免疫性疾病,因此巨噬细胞和树突状细胞介导的天然免疫应答和炎症反应必须受到严密的调控,然而关于炎症反应的精细调节机制尤其是转录水平的调节尚有很多未解之处。我们课题组聚焦研究天然免疫细胞及其介导的炎症反应在感染性疾病和炎症性疾病中的作用,以及机体如何精细调控天然免疫细胞的活化和功能。本课题就组蛋白去甲基化酶(Histone demethylase,HDM)Kdm5b(lysine demethylase 5B)和RNA结合蛋白Rbm25(RNA binding motif protein 25)在天然免疫细胞介导的炎症触发和消退中的作用和分子机制展开探索。巨噬细胞和树突状细胞通过其上表达的模式识别受体如Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)识别病原体来源的病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),启动天然免疫应答反应,快速触发炎症反应以抵御病原体的入侵。机体如何在有效清除感染的同时避免因过度的炎症反应而造成组织损伤,尚需深入阐明。在第一部分研究中,我们通过对重要的组蛋白H3K4去甲基化酶家族成员进行功能筛选,发现组蛋白去甲基化酶Kdm5b对于TLRs诱导的IL-6、TNF-α和IFN-β等多种细胞因子的产生是必需的。利用Kdm5b的siRNA和Kdm5b基因敲除小鼠(Kdm5b-KO),发现Kdm5b的表达下调或缺失均能降低巨噬细胞和树突状细胞TLR配体刺激产生的多种炎症因子。在内毒素休克模型中,Kdm5b敲除小鼠血清中IL-6、TNF-α、IFN-β、IL-1β、IL-12p70的水平较野生型小鼠显着降低,Kdm5b敲除小鼠肺部的炎症细胞浸润和损伤减轻。Kdm5b缺陷显着抑制小鼠巨噬细胞中TLR诱导的NF-κB通路的活化,而过表达Kdm5b能够剂量依赖性地促进NF-κB报告基因活性。机制研究发现Kdm5b能够抑制天然免疫负向调控分子NLRC5的诱导表达。巨噬细胞活化后,Kdm5b能特异性地结合到NLRC5的启动子区,通过其H3K4去甲基化酶活性,降低启动子区H3K4me3的水平,从而抑制NLRC5的转录和表达,上调NF-κB活化水平,最终促进炎性细胞因子和I型干扰素的产生。该研究揭示了组蛋白去甲基化酶Kdm5b促进天然免疫细胞介导的炎症反应的表观调控作用,丰富了天然免疫应答的内源性表观调节机制,为内毒素休克和感染性疾病的治疗提供了新的潜在靶点。天然免疫细胞上的模式识别受体除了识别PAMPs,也能识别损伤、凋亡或坏死细胞释放的细胞内容物,即损伤相关分子模式(Damage-assoicated molecular patterns,DAMPs),触发内源性炎症。上述内源性刺激介导的天然免疫细胞持续过度活化会引起病理性的内源性炎症,造成机体组织的免疫病理破坏,导致以类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)为代表的多种慢性炎症性疾病。在第二部分的研究中,我们通过分析RA患者以及胶原诱导的关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠滑膜组织的基因芯片检测结果,鉴定到RNA结合蛋白Rbm25(RNA binding motif protein 25)在RA患者和CIA小鼠中表达显着降低。LPS刺激也诱导巨噬细胞中Rbm25的表达降低。利用siRNA干扰Rbm25表达后,巨噬细胞中IL-1?、IL-6、IL-23、GM-CSF等多种细胞因子的mRNA和蛋白水平的表达显着增加,而这些细胞因子对于RA疾病中Th17细胞的分化和功能,以及成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖和活化至关重要。此外,用Rbm25干扰的巨噬细胞的上清液培养成纤维样滑膜细胞发现可以促进其增殖,在FLS细胞中干扰Rbm25的表达亦能够促进其炎症介质和基质金属蛋白酶(MMP)包括MMP3、MMP9和MMP13的产生。机制研究发现Rbm25并不影响MAPK和NF-?B的活化,亦不影响上述细胞因子mRNA的降解。对Rbm25干扰的巨噬细胞进行全转录组分析,发现多个免疫基因及表观修饰分子的可变剪切发生外显子跳跃(Skipped exon,SE)。生物信息分析发现发生外显子跳跃的基因主要是发挥基因转录及转录调节相关功能。进一步研究表明Rbm25控制重要表观调控分子NCOR1和NCOR2的转录本的可变剪切,预计影响其免疫活化功能从而下调免疫应答的活化,抑制炎症反应。当某些因素导致Rbm25的表达下降,就会引起巨噬细胞的过度活化,炎症消退障碍,参与慢性炎症性疾病的发生发展。而Rbm25抑制巨噬细胞介导的炎症反应的具体分子机制,包括Rbm25所作用的可变剪切的靶mRNA以及该可变剪切体的免疫学功能,还有待于进一步的深入研究。上述两部分的工作揭示了组蛋白去甲基化酶Kdm5b和RNA结合蛋白Rbm25在天然免疫应答和炎症反应中的调控作用,阐述了炎症反应的转录水平的新型调节机制,丰富了感染性疾病和慢性炎症性疾病的发生机理。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
邹琪琪,齐姗姗,谢录翰,辛琪,李俊乐[5]（2018）在《细菌单杂交方法在筛选甲基营养菌甲醇脱氢酶启动子结合蛋白中的应用》一文中研究指出为了构建甲基营养菌转录因子亚文库及筛选与甲醇脱氢酶启动子DNA相互作用的蛋白质,对甲基营养菌MP688的基因组和转录组数据进行分析,使用关键词对全基因注释信息和转录组结果进行搜索,找到相关基因的核苷酸序列,通过PCR获得目的片段并构建一系列转录因子亚文库,利用细菌单杂交系统筛选转录因子亚文库找到与甲醇脱氢酶启动子具有相互作用的调控因子。成功构建完成含有32个转录因子的亚文库,建立了甲基营养菌中细菌单杂交筛选方法,通过该方法筛选出2个与甲醇脱氢酶启动子具有强相互作用的转录因子基因。对于基因组已测序的细菌来说,构建转录因子亚文库筛选效率要优于构建基因组文库和c DNA文库,细菌单杂交系统能成功用于甲基营养菌,并能快速高效地筛选与启动子具有相互作用的转录因子。这一方法的建立,为阐明甲醇脱氢酶在甲基菌生长和代谢产物合成中的调控机制奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2018年10期）
宗燕[6]（2018）在《甲基化CpG结合蛋白2在胃癌中的表达及其对胃癌细胞多药耐药性的作用》一文中研究指出目的:针对甲基化CpG结合蛋白2在胃癌患者中的表达情况以及与胃癌细胞多药耐药性的具体关系作用加以分析。方法:本次研究共纳入67例均已经病理检查确诊的单纯胃癌患者作为样本,分析纳入患者甲基化CpG结合蛋白2的表达情况以及对胃癌细胞多药耐药性的关系进行统计学研究。结果:甲基化CpG结合蛋白2在胃癌组织中呈高表达,且表达水平与患者肿瘤分期以及肿瘤转移情况具有密切的相关关系,且在I、Ⅱ期患者中的表达水平远高于Ⅲ、Ⅳ期患者,统计分析显示P<0.05,差异具备统计学意义。结论:甲基化CpG结合蛋白2在胃癌患者中的表达率相对较低,且与患者病症分期存在有密切关联,同时更存在有对多药耐药性进行抑制的效果。(本文来源于《影像研究与医学应用》期刊2018年12期）
王莉娜[7]（2018）在《DNA甲基化修饰和脂肪酸结合蛋白3在卵巢功能不全中的机制研究》一文中研究指出研究背景卵巢功能不全(Primary ovarian insufficient,POI)是妇科常见的内分泌疾病之一。生育能力降低,围绝经期症候群等症状严重困扰着女性的生殖健康和正常生活。大量科学研究证实,POI是与环境和遗传有关的多基因遗传病,发病机制尚未明了。表观遗传学是将环境因素和遗传因素连接起来的重要环节,目前备受关注。DNA甲基化作为表观遗传修饰的重要手段一直是研究的热点,但是针对POI甲基化研究主要集中在单个基因或一些基因。随着科学技术的飞速发展,在全基因组范围内了解甲基化变化成为可能。本研究分析了 POI的全基因组DNA甲基化变化谱,筛选出甲基化差异候选基因,心脏型脂肪酸结合蛋白基因(Heartfatty acid-binding protein,H-FABP,FABP3)。FABP3 作为脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding proteins,FABPs)家族成员之一,是细胞内的一种小分子蛋白。它能可逆性的与疏水性配体结合,参与细胞内脂肪酸的摄取、转运和代谢。因此FABP3在脂质代谢过程中起着重要的作用。脂代谢异常与卵巢功能不全存在密切的关系,因此推测在POI的发生和发展中脂肪酸结合蛋白3可能有一定的作用。研究目的全面分析卵巢功能不全中颗粒细胞DNA甲基化变化谱,筛选甲基化差异候选基因,明确甲基化差异候选基因在POI中的作用。研究方法收集2例POI患者以及3例卵巢功能正常女性的卵泡液,分离颗粒细胞;利用试剂盒提取颗粒细胞的DNA;然后将DNA进行甲基化全基因组亚硫酸氢盐测序的文库制备;最后在Illumina HiSeq平台上进行PE125/PE150测序和分析,筛选出甲基化差异基因。最终本研究得到POI的甲基化差异候选基因,FABP3基因。利用Crispr-cas9技术在人颗粒细胞瘤永生化细胞系(KGN)中建立FABP3基因敲除KGN细胞,对该细胞系进行后续检测。首先,检测雌二醇水平和细胞的增殖能力;第二步,检测雌二醇生物合成限速酶基因(CYP19A1)的变化;第叁步,利用DNA pull down技术,寻找与CYP19A1基因启动子结合蛋白并对其进行相关分析;第四步对FABP3基因敲除KGN细胞的游离脂肪酸及相关基因进行了测定。研究结果分析卵巢功能不全的颗粒细胞全基因组DNA甲基化谱结果显示,POI实验组与卵巢功能正常对照组总体DNA甲基化水平无统计学差异;DNA甲基化在基因组中的分布模式是:在转录起始位点甲基化水平急剧下降,从转录起始位点向下游甲基化水平逐渐增高至平台期;对差异甲基化区域和差异甲基化基因进行GO和KEGG分析,差异甲基化基因被富集在210个GO亚类中和56个KEGG通路中;对差异甲基化基因分析,筛选出POI的候选基因,心脏型脂肪酸结合蛋白3基因;在敲除FABP3基因的KGN细胞系出现了类似POI的表型——KGN细胞分泌分泌雌二醇水平降低,细胞增殖能力下降;与对照组KGN细胞比较,敲除FABP3基因的KGN细胞系雌激素合成的限速酶芳香化酶基因(CYP19A1)的基因表达和蛋白水平均有下调;与CYP19A1基因启动子直接结合的蛋白是核转录因子κB(NF-κB),NF-κB的抑制性蛋白α(IκBα)基因表达水平和蛋白水平也上调;游离脂肪酸水平也有明显增高,差异均有统计学意义。过表达过氧化物酶受体α(PPARα)基因的KGN细胞系也表现出敲除FABP3基因KGN细胞系的表型。研究结论明确了卵巢功能不全中颗粒细胞DNA甲基化变化谱,筛选出了与POI甲基化差异候选基因,即FABP3基因。FABP3基因介导了敲除FABP3基因的KGN细胞系中雌二醇的下调,具体机制是:负责脂肪酸细胞内转运的脂肪酸结合蛋白3被敲除后,导致细胞中游离脂肪酸升高;升高的游离脂肪酸活化了 PPARα;PPARα基因促进了 IκBα基因的表达,从而抑制了 NF-κB的入核,导致CYP19A1基因表达下调,最终导致雌二醇的生成降低。这为探索POI的发生机制提供了新的理论基础。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-20）
刘文华[8]（2017）在《多发性骨髓瘤细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白7的基因表达及甲基化调控》一文中研究指出目的:胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)许多疾病中被认为一种抑癌基因,本研究意义在于探索胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)在体外实验多发性骨髓瘤细胞株U266中表达,并探测U266中IGFBP7启动子甲基化程度,进一步通过甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-dc)干预并检测对瘤细胞增殖影响。方法:体外培养U266细胞株,并以正常对照骨髓单个核细胞(N-BMMNC)作为对照,分别提取RNA,采用实时RT-PCR检测IGFBP7mRNA水平的表达,提取细胞DNA重亚硫酸氢钠甲基化修饰,采用甲基化特异性PCR(MSP)实验方法研究其CpG岛的甲基化水平,不同阶梯浓度的5-aza-dc(5、10和20μmol/L)干预U266细胞株,在48h收集细胞,采用实时RT-PCR法和蛋白印迹法检测不同浓度各组IGFBP7mRNA及各组蛋白表达,流式细胞术检测分析药物干预前后各组细胞的细胞凋亡及周期。统计学方法采用SPSS 17.0统计软件对各组实验结果进行分析,数据均用`x±SD表示,两组间比较采用t检验,多组对照使用统计方法为单因素方差分析,P<0.05表示组间差异有统计学意义。结果:U266细胞株IGFBP7 mRNA较N-BMMNC呈下调表达,MSP检测U266 IGFBP7的启动子CpG岛存在明显甲基化,不同阶梯浓度的5-aza-dc干预U266细胞株48 h,观察到IGFBP7 mRNA呈剂量依赖型表达增高(r=0.952,P<0.05),IGFBP7蛋白表达呈剂量依赖型增高(r=0.983,P<0.05),药物浓度阶梯增加使得U266在G0/G1期细胞随浓度依赖增多(r=0.966,P<0.05),细胞凋亡率亦随浓度依赖增加(r=0.958,P<0.05)。结论:U266细胞中IGFBP7 m RNA较N-BMMNC表达下调,该种表达下调或失活机制与IGFBP7启动子的CpG岛的异常高甲基化有关,5-aza-dc干预使得U266细胞中IGFBP7mRNA及其蛋白水平恢复表达,并通过使得细胞周期停滞、诱导凋亡施展该药物对U266细胞的增殖抑制作用。(本文来源于《山西医科大学》期刊2017-04-15）
王欣[9]（2017）在《外周血单核细胞碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）基因启动子甲基化与2型糖尿病的相关性研究》一文中研究指出目的:检测2型糖尿病(T2DM)患者及外周血单核细胞碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因启动子区甲基化水平,了解ChREBP启动子甲基化与T2DM的关系。方法:据1999年WHO的糖尿病诊断及分型标准,选取武汉大学中南医院内分泌科确诊为2型糖尿病患者65例和同期本院健康体检者25例。分为:A组(对照组)、B组(2型糖尿病组)、测定记录其一般资料,包括性别、年龄、身高、体重、腰围、臀围、血压、糖尿病病程等一般临床基线资料,根据公式计算出腰臀比(WHR)、体重指数(BMI)。采集研究对象空腹静脉血标本经肝素抗凝,使用全自动生化分析仪测定空腹血糖(FPG)、血清胆固醇(TC)、甘油叁酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、同型半胱氨酸(HCY)、糖化血红蛋白(HbA1c)等生化指标;提取外周血白细胞DNA,应用甲基化特异性PCR亚硫酸氢盐限制性内切酶法(BSP)检测ChREBP基因启动子甲基化平均水平。应用R-TPCR方法检测ChREBP基因的mRNA的表达。采用SPSS17.0统计软件进行数据处理。计量资料用均数±标准差表示,两组间均数比较采用t检验。两组间甲基化率比较运用卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:与对照组相比,T2DM组在年龄、性别比、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、WHR等一般基线资料无统计学差异(P>0.05),说明基线齐,资料具有可比性;T2DM组患者ChREBP基因启动子平均甲基化水平高于对照组(p<0.05),T2DM组平均甲基化率为:(42.48%),对照组平均甲基化率为(5%);糖尿病组ChREBP基因8个CpG位点的甲基化率均高于对照组;如:CPGsites1、CPGsites2、CPG sites3、CPGsites4、CPGsites5、CPGsites6、CPGsites7、CPGsites8,在两组中比较,差异有统计学意义(P<0.01)。使用RT-PCR方法检测ChREBP基因mRNA表达,结果显示,2型糖尿病组ChREBP基因mRNA表达水平显着高于对照组。结论:2型糖尿病患者ChREBP基因启动子的甲基化水平明显增高,影响ChREBP基因的表达,本研究通过检测ChREBP基因启动子CpG位点的甲基化状态,推测2型糖尿病患者外周血白细胞中ChREBP基因部分启动子区异常甲基化水平可能与糖尿病的发生有一定的关系。(本文来源于《武汉大学》期刊2017-03-01）
沈未[10]（2016）在《人类胚胎干细胞5-羟甲基胞嘧啶识别蛋白HMCES以及大肠杆菌单链DNA结合蛋白RecT的结构初探》一文中研究指出1.人类胚胎干细胞5-羟甲基胞嘧啶识别蛋白HMCES的结构初探表观遗传学修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑等,其中DNA甲基化研究的最为深入。由于在甲基化以及去甲基化过程中的重要作用,5-甲基胞嗡啶(5mC)被称为第五种碱基,5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)被称为第六种碱基。5mC被TET酶进一步氧化为5hmC后,HMCES作为一个5hmC识别蛋白,能通过结合5hmC从而招募下游蛋白发挥功能,最终将5mC转换为普通的胞嘧啶。在这个过程中HMCES有肽酶活性,能通过自剪切来调控下游信号。这也是其独特之处。本实验首先在体外克隆了HMCES的全长基因,构建了HMCES-MBP与HMCES两个载体,然后通过原核表达系统在体外进行了表达鉴定。我们首先对HMCES-MBP进行了纯化,发现蛋白在TEV酶酶切之后降解消失,因此我们又针对性地对HMCES的表达进行了优化,发现了HMCES的持续性降解现象。通过质谱分析、二级结构预测等手段找到HMCES稳定的酶解片段HMCES-276之后,我们对HMCES-276又重新进行了克隆、表达与纯化。在解决了HMCES-276的聚合问题之后,经过多次优化,通过晶体初筛最终得到了晶体,下一步衍射收到数据之后,即可通过结构解析揭示其功能基础,后续的工作正在进展当中。2.大肠杆菌单链DNA结合蛋白RecT的表达纯化外界环境和细胞内部的诸多因素经常会导致DNA分子的损伤或改变。为了应对DNA损伤,减小对细胞的影响,细胞在长期进化过程中,形成了多种DNA损伤的修复系统,包括光复活修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复、重组修复、SOS修复、双链断裂修复等多种修复方式。其中重组修复途径在真核生物与原核生物中是不同的。在原核生物中,主要是通过Rec蛋白系列完成的,包括：RecABCD, RecFOR及RecET。RecT存在于大肠杆菌中,通过结合单链DNA,与RecE互相作用来促进互补的ssDNA复性。对于该部分的工作,我们试图通过结构生物学的方法阐明RecT促进ssDNA复性的结构基础。我们首先采用原核表达系统,对RecT进行体外克隆以及表达纯化,但晶体筛选之后并没有得到晶体。我们又对初筛过程进行了优化,分别加入了稳定RecT的Mg2+以及RecT的底物ssDNA孵育,仍然没有长出晶体。此时我们转换思路,尝试对RecT的截短片段进行研究。我们分别克隆了RecT的两个截短片段,但在纯化过程中发现,只有RecT (94-C)可以稳定表达,随后对RecT-C片段进行了晶体筛选,目前后续的优化正在进行中,以期能拿到晶体通过X射线衍射晶体学的方法解析RecT结构,揭示其是如何发挥功能的。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2016-09-01）
甲基结合蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究甲基结合蛋白1(Mbd1)对小鼠胚胎干细胞克隆形态及增殖的影响。方法:设计针对Mbd1转录起始位点的gRNA,将表达有gRNA和Cas9蛋白的质粒使用脂质体转染方法转入小鼠胚胎干细胞(J1);使用抗生素将未转染成功的细胞杀死后,细胞继续培养7 d,挑取单克隆细胞,采用PCR法筛选敲除Mbd1的纯合子细胞,观察Mbd1缺失对小鼠胚胎干细胞克隆形态的影响;使用细胞计数法检验Mbd1对胚胎干细胞增殖的影响。结果:通过Cripsr/Cas9成功获得敲除Mbd1的胚胎干细胞,Mbd1缺失后的小鼠胚胎干细胞丧失了常规小鼠胚胎干细胞的3D克隆形态,细胞呈现单层扁平克隆;Mbd1缺失后小鼠胚胎干细胞增殖速率变慢。结论:Mbd1通过影响小鼠胚胎干细胞克隆形态和增殖而影响胚胎干细胞的多能性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
甲基结合蛋白论文参考文献
[1].朱腾,晋红中.泛发性脓疱型银屑病患者外周血单个核细胞甲基化酶及甲基化CpG结合蛋白mRNA的表达水平[J].协和医学杂志.2019
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标签：DNA甲基转移酶; 甲基化CpG结合蛋白; 泛发性脓疱型银屑病;