中国樱桃花粉SFB基因的克隆及其鉴定

论文摘要

为分离自交亲和的四倍体植物中国樱桃（Prunus. psedocerasus L.）花粉S-决定子基因,本研究采用中国樱桃品种‘泰小红樱’为试材,根据李属不同树种的花粉SFB基因序列设计兼并引物,应用RT-PCR、RACE等技术分离并鉴定了几个花粉SFB基因。结果如下:1应用RT-PCR技术,从花粉cDNA中分离到了1个中间片段,与扁桃花粉SFB基因高度同源。用3’-RACE分离到1个3’末端序列,与扁桃花粉SFB基因高度同源。分离到3个5’末端序列,分别与扁桃和梅的花粉SFB基因高度同源。2拼接5’末端序列、RT-PCR中间片段和3’末端序列后,得到了一个全长序列,全长1171bp,开放式阅读框编码375个氨基酸,N端氨基酸序列具有花粉SFB基因的F-box基序,与扁桃花粉SFB基因高度同源,并具备李属花粉SFB基因的序列特征,命名为SFBc,在GenBank上的注册号为EU267943。3另外两个5’-端序列核酸序列长度均为656bp,编码214个氨基酸,其N端氨基酸序列都具有花粉SFB基因的F-box基序,分别与梅和扁桃的花粉SFB基因高度同源,分别命名为SFBa和SFBb。SFBa和SFBb在GenBank上的注册号分别为EU267941和EU267942。4基因的进化树表明,中国樱桃花粉SFB基因与李属花粉SFB/SLF位于同一个进化分枝,而苹果属花粉SFB基因与茄科、玄参科的处于另外一个进化枝。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 植物自交不亲和现象
• 1.2 S-RNase 介导花粉管RNA 降解的配子体自交不亲和性机制
• 1.2.1 花柱中表达的S 基因
• 1.2.1.1 S-RNase 的性质及结构特点
• 1.2.1.2 S-RNase 的作用机理
• 1.2.2 花粉中表达的SLF/SFB 基因
• 1.2.2.1 花粉S 基因的发现
• 1.2.2.2 SLF/SFB 的序列及结构特点
• 1.2.2.3 泛素介导的蛋白SCF 途径
• 1.2.2.4 SLF/SFB 在配子体自交不亲和中的可能作用
• 1.3 李属自交亲和（SC）分子机制研究
• 1.3.1 二倍体中的SC
• 1.3.2 多倍体中的SC
• 1.4 研究目的
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 菌株与质粒
• 2.1.3 酶及生化试剂
• 2.1.4 培养基和溶液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 植物材料总 RNA 的提取
• 2.2.2 反转录cDNA 第一链的合成
• 2.2.3 引物设计
• 2.2.3.1 兼并引物设计
• 2.2.3.2 基因特异性引物设计
• 2.2.4 PCR 扩增
• 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
• 2.2.5.1 大肠杆菌感受态细胞的制备
• 2.2.5.2 连接反应
• 2.2.5.3 大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选
• 2.2.6 碱法小量质粒 DNA 的提取
• 2.2.7 cDNA 测序及多重序列比对
• 2.2.8 开放式阅读框分析及蛋白分析
• 2.2.9 进化树分析
• 3 结果与分析
• 3.1 电泳检测中国樱桃花粉 RNA 的完整性
• 3.2 RT-PCR 方法克隆花粉SFB 基因的中间片段
• 3.3 花粉 SFB 基因的 3'-末端序列的分离
• 3.4 5'-末端序列扩增及全长基因的分离
• 3.5 SFB 基因进化关系分析
• 4 讨论
• 4.1 SFB 基因的特征
• 4.2 SFB 基因进化关系分析结果
• 4.3 关于中国樱桃花粉SFB 基因的表达
• 结论
• 参考文献
• 附录 品种中英文对照
• 致谢
• 硕士研究生期间发表文章