小干涉RNA递送方法的研究

论文题目: 小干涉RNA递送方法的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 临床检验诊断学

作者: 党颖

导师: 王应雄

关键词: 干涉,核酸递送,重组病毒载体,阳离子脂质体,阳离子多聚物,蛋白转导技术

文献来源: 重庆医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: RNAi 是指同源双链 RNA 所引发的特异序列的转录后基因沉默现象。哺乳动物细胞中,小于 30bp 的小双链 RNA 可以避开干扰素反应并在哺乳动物细胞内引发基因沉默。在功能基因组研究、药物靶点筛选、病毒防治、肿瘤治疗等研究领域中,RNAi 都是一种非常有用的基因敲除方法,具有广泛的应用前景。现有的在真核细胞中的 RNAi 技术可以分为两大类:⑴ 通过各种方法在体外制备小干涉 RNA(small interfering RNA,siRNA)后直接将其递送到真核细胞中。 ⑵ 将表达产物在细胞内自发形成 siRNA 的 DNA 表达框递送到真核细胞中。而所有这些方法的实现都依赖于建立一种核酸递送系统,即一种能够有效包裹和传递外源的遗传物质进入特定类型细胞的高效、低毒的载体系统。核酸递送载体系统可以被分为生物载体(主要是指病毒载体)和非生物载体两大类。病毒载体有着感染细胞的天性,有一整套将自己的基因导入靶细胞的步骤。然而制备与生产的困难、细胞毒性、免疫原性以及包装外源基因的大小限制是病毒载体应用面对的主要障碍。非病毒类核酸递送系统往往是在生理条件下带正电荷的化合物,包括阳离子多聚物,阳离子脂质体等。它们通过电荷相互作用与阴性负荷的核酸相互作用并通过内吞作用进入到细胞内。它不需要面对病毒类载体的种种不利,制备简便,没有免疫原性。但是它们导入外源基因的效率远低于病毒类载体,如何提高效率和稳定性,保证安全性一直是研究关注的重点。

论文目录:

符号说明

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分：脂质体 Dc-Chol/DOPE 介导小干涉 RNA 的转染研究

一、阳离子脂质体Dc-Chol/DOPE 的制备及其常规转染观察

二、阳离子脂质体Dc-Chol/DOPE 介导寡核苷酸内吞

三、阳离子脂质体Dc-Chol/DOPE 转染siRNA 抑制报告基因表达

四、DC-Chol

第二部分：PEI/PLA 复合物介导小干涉RNA 的转染研究

第三部分：脂质体 Dc-Chol/DOPE 在病毒制备中的应用

一、脂质体DC-Chol/DOPE 对HEK293FT 细胞的高效转染

二、 DC-Chol/DOPE 转染与磷酸钙共沉淀方法制备病毒的效率比较

第四部分：重组腺病毒转染及其在 RNAi 中应用的研究

一、TAT 多肽在重组腺病毒转染中的作用与机理

二、重组腺病毒载体对p53 基因的抑制

研究总结

参考文献

文献综述

致谢

发表论文情况

发布时间: 2005-07-22

参考文献

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小干涉RNA递送方法的研究

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