康莱特对肝癌细胞HepG2体外增殖的抑制作用及机制

论文摘要

目的:通过观察康莱特注射液（KLT）对体外肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响作用,初步探讨其机制,为其能否应用于肝癌的临床治疗提供理论依据。方法:体外培养人肝癌细胞HepG2,用不同浓度的KLT（5μl/ml、10μl/ml、15μl/ml、20μl/ml）培养肝癌细胞HepG2。采用细胞毒试验（MTT法）观察不同浓度和作用时间的康莱特对HepG2细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测药物作用后HepG2细胞凋亡的发生,并检测相关凋亡蛋白Fas和Fas-L的变化,荧光定量PCR检测Fas mRNA和Fas-L mRNA的表达,并与空白对照组进行对比。结果:（1）KLT能明显抑制人肝癌细胞HepG2的生长,且呈时间和浓度依赖性;随药物浓度加大和作用时间延长,存活细胞数量逐渐减少;（2）流式细胞术证实KLT可诱导肝癌细胞HepG2凋亡;与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显增加;（3）与对照组相比,KLT处理组HepG2细胞中Fas蛋白分别升高11.01%、18.71%、28.71%、37.15%,Fas-L蛋白分别升高1.49%、1.91%、3.27%、3.38%,与对照组比较差异有统计学意义（p＜0.05）:（4）荧光定量PCR结果表明Fas mRNA和Fas-L mRNA含量升高,与对照组比较差异有统计学意义（p＜0.05）。结论:（1）KLT可通过抑制细胞增殖和诱导凋亡途径抑制人肝癌细胞HepG2的生长;（2）KLT可升高肝癌细胞HepG2 Fas和Fas-L蛋白的表达和诱导HepG2细胞FasmRNA和Fas-L mRNA含量升高,可能通过此途径发挥其抑制细胞增殖、诱导凋亡的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要仪器及一次性用品
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 引物
• 1.1.4 主要液体的配制
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 人肝癌细胞HepG2传代
• 1.2.2 细胞毒试验（MTT法）
• 1.2.3 流式细胞仪测定凋亡细胞
• 1.2.4 流式细胞仪检测Fas和Fas-L的表达
• 1.2.5 荧光定量PCR检测Fas mRNA和Fas-L mRNA的表达
• 第二章 结果
• 2.1 人肝癌细胞的培养
• 2.2 康莱特对肝癌细胞增值的抑制作用
• 2.3 康莱特对肝癌细胞凋亡的促进作用
• 2.4 流式细胞仪法检测Fas、FasL蛋白的表达
• 2.5 荧光定量PCR检测Fas mRNA和Fas-L mRNA的表达
• 第三章 讨论
• 3.1 康莱特注射液对肝癌细胞的抑制作用
• 3.2 康莱特注射液诱导HepG2细胞凋亡
• 3.3 康莱特注射液诱导HepG2细胞Fas、FasL蛋白的表达增强
• 3.4 康莱特注射液诱导HepG2细胞Fas mRNA和Fas-L mRNA含量升高
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢