论文题目: 梅花种质资源的亲缘关系分析和遗传多样性分子评价
论文类型: 博士论文
论文专业: 植物学
作者: 杨朝东
导师: 包满珠
关键词: 梅花,聚类分析,亲缘关系,系统发育,遗传多样性,分子方差分析
文献来源: 华中农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 1 梅花AFLP体系构建和引物筛选 梅花（Prunus mume,2n=16）属于蔷薇科（Rosaceae）,Prunoidese亚科,李属（Prunus L.）植物,在中国、朝鲜和日本是著名的早春开花的观赏植物。AFLP是目前研究物种遗传变异常用的分子标记之一,它首次应用于梅花种质资源的遗传多样性和亲缘关系的研究。本研究采用EcoR Ⅰ/Pst Ⅰ限制性内切酶组合酶切梅花基因组DNA的AFLP实验流程。从256对AFLP引物中筛选出10对多态性位点最高的引物,这些引物扩增出高的多态性位点在‘雪梅’等14个梅花品种中具有可靠的重复性,共扩增出清晰可记录524个位点,其中233个为多态性位点,多态性位点的百分率从35.71%到59.67%之间不等,平均百分率为44.46%,可用来分析更多梅花品种之间的遗传关系。AFLP是一种效率高、花费适中、节约时间、但操作比较复杂的研究梅花遗传分化的技术。 2 应用AFLP初步探讨梅花品种间的亲缘关系 应用AFLP技术初步研究了1个半野生种,1个杂交子代和18个梅花品种,代表梅花主要类、型,共计20株梅花的亲缘关系,19对选择性引物扩增出清晰的总位点数为918个,其中多态性位点324个,多态性位点百分率为35.29%。采用SAS类平均法聚类分析AFLP数据,λ值为0.9759时,将20株梅花分为四个类群。半野生‘曲梗梅’的多态位点数最高,‘多萼朱砂’、‘复瓣小宫粉’等梅花品种次之。在类群Ⅳ中,具有明显亲缘关系的两组杂交亲本及其子代各自聚为一组,表明AFLP技术和聚类分析方法可以用来研究梅花品种间的亲缘关系。‘小宫粉’、‘江南朱砂’和它们的子代亲缘关系密切,聚类分析结果仍能区别其较小差异,这有助于解决梅花中不同产地相同品种异名和同名而品种不同的情况。垂枝类梅花品种间有较近的亲缘关系或者遗传来源,支持枝姿作为梅花分类的重要形态特征,垂枝类品种属于梅花中比较进化的类群与其历史演化记录相吻合。本研究中所采用的DNA限制性内切酶酶切组合及所筛选的AFLP引物对适合研究梅花品种间的亲缘关系和遗传多样性。 3 AFLP技术对梅花杂交种的快速鉴定 应用银染法AFLP鉴定以父本‘多萼朱砂’与母本‘雪梅’杂交所得12株F1子代。以E-AT/P-AT选择性引物对扩增,父本180bp左右的特异带在12株F1代中都呈阳性带;母本170bp左右的两条特异带在12株F1代中也都呈阳性带,双亲基因组DNA中这3个特异位点在F1子代中稳定遗传。结果表明这12株均为‘多萼朱
论文目录:
缩略语表
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关键词
英文摘要
英文关键词
第一章 文献综述
1 关于梅花几个方面的研究进展
1.1 梅种的起源探讨
1.2 梅的自然地理分布
1.3 梅的种质资源研究进展
1.4 梅花品种的演化历史记录及演化趋势
1.5 梅的品种分类研究进展
1.6 梅花的栽培与育种进展
1.7 梅花自交不亲和研究进展
2 生物遗传多样性的理论与应用
2.1 生物遗传多样性的概念及意义
2.2 遗传多样性的研究方法与应用
2.2.1 形态标记
2.2.2 细胞学标记
2.2.3 生化标记
2.2.4 分子标记
2.2.4.1 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性酶切片段长度多态性)
2.2.4.2 RAPD(random amplified polymorphism DNA，随机引物扩增DNA多态性)
2.2.4.3 AFLP(Amplified fragment length polymorhism，扩增片段长度多态性)
2.2.4.4 SSR(simple sequence repeat，简单重复序列)
2.2.4.5 ISSR(inter-simple sequence repeat，简单重复序列间扩增)
2.2.4.6 SNP(single nucleotide polymorphisms，单核苷酸多态性)
2.3 分子标记在研究植物遗传多样性和亲缘关系的应用
2.3.1 分子标记在研究重要经济植物遗传多样性和亲缘关系的应用
2.3.2 分子标记在研究李属(Prunus)植物系统发育、亲缘关系和遗传多样性的应用
2.3.3 梅与桃、李、杏等近缘种亲缘关系的研究进展
2.3.4 应用分子标记研究梅花品种的分类和亲缘关系的分析
3 本研究的意义和目的
第二章 梅花AFLP体系构建和引物筛选
1 前言
2 材料和方法
2.1 材料
2.2 方法
2.2.1 DNA提取
2.2.2 AFLP接头和引物
2.2.3 AFLP模板制备
2.2.4 AFLP扩增反应
2.2.5 电泳和银染显影
2.2.5.1 PAGE凝胶制备
2.2.5.2 电泳上样
2.2.5.3 固定、染色、显影
3 结果与讨论
3.1 AFLP分析——用‘雪梅’进行引物选择
3.2 AFLP分析——用5个梅花品种选择引物
3.3 AFLP分析——用14个梅花品种选择引物
第三章 应用AFLP初步探讨梅花品种间的亲缘关系
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 方法
2.2.1 基因组DNA提取和检测
2.2.2 AFLP分子标记实验流程
2.2.3 数据收集、处理方法
3 结果与分析
3.1 AFLP选择性扩增结果
3.2 聚类分析结果
3.3 梅花亲缘关系分析
4 讨论
第四章 AFLP技术对梅花杂交种的快速鉴定
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.2 方法
2.2.1 基因组DNA提取和检测
2.2.2 AFLP分子标记实验流程
3 结果与分析
4 讨论
第五章 梅花种质资源的亲缘关系和遗传多样性分析
1.前言
2.材料与方法
2.1 实验材料
2.2 方法
2.2.1 基因组DNA提取和检测
2.2.2 AFLP分子标记实验流程
2.2.3 数据收集、处理方法
3.结果与分析
3.1 AFLP选择性扩增结果
3.2 聚类分析结果
3.3 梅花遗传亲缘关系和系统发育分析
3.4 本研究结果与形态分类的比较
3.5 小结
3.5.1 本研究供试样本的聚类分析
3.5.2 梅花遗传亲缘关系和系统发育分析
3.6 梅花种质资源的遗传多样性分子评价
4 讨论
5 结论
参考文献
图版与说明
论文发表
致谢
发布时间: 2005-12-05
参考文献
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