L1，β-catenin，E-cadherin在大肠癌中表达的临床意义研究

论文摘要

大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐年上升的趋势。肿瘤的浸润和转移是恶性肿瘤的两大主要特点,是导致患者术后死亡的直接原因,因此,阐明影响大肠癌患者预后及肿瘤浸润和转移密切相关的分子生物学行为,预测大肠癌的浸润和转移潜能,从而指导临床治疗,采取更积极有效的综合治疗,同时,为今后大肠癌的基因治疗提供理论根据。肿瘤浸润是肿瘤细胞与细胞外基质相互作用的过程,它包括细胞黏附、基质降解和细胞运动三个步骤,其中细胞-细胞间黏附的破裂是肿瘤转移过程的第一步。L1型神经细胞黏附分子（L1）是免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白之一,L1通过细胞间的相互作用的调节在神经系统的发展中扮演重要的角色,包括神经迁徙、神经派生和成束、突触的形成。L1在多种肿瘤细胞中被检测到,如神经、间皮、上皮来源的肿瘤细胞中,诸如神经母细胞瘤、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、小细胞肺癌、大肠癌和乳腺癌中。L1在恶性肿瘤的转移事件中扮演重要的角色。β-环连素（β-catenin,β-cat）是环连蛋白家族中的一员,功能多样,能与20多种蛋白质结合,是一种新的原癌基因的产物。作为具有信号转导和细胞间黏附双重功能的分子,β-cat是近年来研究异常活跃的热点。β-cat参与Wnt信号转导通路,亦是构成黏附连接的E-cad/cat复合体的胞内重要组分,可通过与多种蛋白结合而参与肿瘤的发生发展、增殖分化、侵袭转移等生物学过程。作为细胞黏附分子之一,表皮-钙黏附素（E-cadherin,E-cad）是一类钙依赖性同种上皮细胞亲和性的黏附分子,是维持上皮细胞结构完整性和极性的跨膜糖蛋白,普遍存在于上皮细胞、间胚层细胞和胎盘等处。研究表明,E-cad在多种人类恶性肿瘤中表达低下,且E-cad的表达下降与肿瘤的浸润、转移和预后密切相关。本研究采用免疫组化染色方法（EnVision）,检测L1、β-cat、E-cad在大肠癌组织中的表达,评价L1、β-cat、E-cad在预测大肠癌浸润、转移潜能及预后中的临床意义,从而为大肠癌的综合治疗提供有参考价值的分子生物学指标。本研究收集1988-2001年间浙江省人民医院肛肠外科行大肠癌手术病例的组织标本142例为实验组,另选择来源于正常大肠黏膜标本30例和大肠腺瘤标本30例为对照组。大肠癌分期按Dukes法（A期:癌肿局限于肠壁,肠外组织及淋巴结无累及;B期:癌肿累及肠外组织,但淋巴结阴性;C期:淋巴已有转移;远处转移包括于Dukes D期内）。所有标本均经常规10%福尔马林固定,石蜡包埋。每例选择有代表性的组织蜡块行连续切片,分别行HE染色和免疫组织化学染色（EnVision）,观察L1、β-cat和E-cad的表达情况。本研究数据统计学处理方法采用SPSS-14统计软件进行统计学处理,计数资料用x2检验或Fishers确切概率法,单因素生存率计算用寿命表法,生存率之间的比较用kaplan-meier检测;多因素生存率分析用Cox回归分析;相关性分析用Spearman等级相关分析。P＜0.05为有显著性差异。30例正常大肠黏膜上皮L1染色全部呈阴性;30例大肠腺瘤中L1染色也全部呈阴性;142例大肠癌染色呈阴性者为98例（69.01%）,呈阳性者为44例（30.99%）。提示L1在大肠癌组织中表达增强。正常黏膜上皮组与大肠癌组比较有明显差异（P＜0.05）;腺瘤组与大肠癌组比较亦有明显差异（P＜0.05）。30例正常大肠黏膜上皮β-cat全部（100%）膜阳性表达;30例大肠腺瘤中9例（30%）染色呈阴性,21例（70%）例呈阳性;而142例大肠癌患者中101例（71.13%）染色呈阴性,41例（28.87%）呈阳性。提示β-cat在大肠癌组织中膜表达有所减弱。正常黏膜组、腺瘤组、大肠癌组两两比较,均有显著性差异（p＜0.05）。30例正常大肠黏膜上皮E-cad染色全部呈阳性;30例大肠腺瘤中9例（30%）染色呈阴性,21例（70%）呈阳性;而142例大肠癌患者中97例（68.30%）染色呈阴性,45例（31.69%）呈阳性。提示E-cad在大肠癌组织中表达减弱或缺失。正常黏膜组、腺瘤组、大肠癌组两两比较,均有显著性差异（p＜0.05）。L1、β-cat、E-cad的表达都与肿瘤分化程度、浸润深度、静脉、淋巴管、淋巴结侵犯与否以及Dukes分期明显相关。L1表达阳性,β-cat、E-cad表达阴性的患者1、3、5年生存率明显低于L1表达阴性,β-cat、E-cad表达阳性的患者。多因素分析结果显示:Dukes分期、L1表达强度可显著预示术后生存情况（p＜0.05）。综上所述,正常大肠黏膜L1为阴性表达;β-cat胞膜表达阳性;E-cad表达为阳性;L1、β-cat、E-cad染色强度与大肠癌的侵袭、转移和预后显著相关,L1表达增强,β-cat、E-cad表达降低的大肠癌患者病期晚、预后差;E-cad、β-cat之间呈正相关,E-cad、β-cat与L1之间呈负相关;Dukes分期、L1的表达强度是大肠癌患者的独立预后指标,可显著预示生存。LI、E-cad均为细胞黏附分子,β-cat是与黏附机制有关的环连素。到目前为止,国内L1与大肠癌之间关系的研究还是空白,少见E-cad和β-cat表达与大肠癌浸润、转移和预后之间的研究报道。而有关L1与大肠癌之间关系的国外报道也缺乏,尤其缺乏三者与大肠癌浸润转移之间的关系的临床随访资料以及它们之间的相关性报道。因而本研究考察LI、β-cat和E-cad的表达水平和大肠癌之间的关系,为该方面研究补充资料,并为大肠癌的综合治疗提供科学依据。

论文目录

• 目次
• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2.实验材料
• 2.1 组织材料
• 2.2 临床资料:
• 2.3 主要实验试剂:
• 2.4 主要实验仪器:
• 3 实验方法
• 3.1 L1,β-cat和E-cad免疫组化染色
• 3.2 结果观察:
• 3.3 统计学处理方法:
• 4 实验结果
• 4.1 L1的表达
• 4.2 β-cat的膜表达
• 4.3 β-cat的异位表达
• 4.4 E-cad的表达:
• 4.5 L1、β-cat和E-cad在大肠癌中的复合表达
• 4.6 L1、β-cat and E-cad在大肠癌组织的相关性分析结果
• 4.7 大肠癌预后相关因子的多因素Cox回归分析
• 5 讨论
• 5.1 L1与大肠癌浸润、转移和预后的关系
• 5.2 β-cat与大肠癌浸润、转移和预后的关系
• 5.3 E-cad与大肠癌浸润、转移和预后的关系
• 5.4 L1、β-cat和E-cad的相关性
• 5.5 L1、β-cat和E-cad与生存率的关系
• 6 结论
• 参考文献
• 综述
• 已录用文章
• 个人简历