γ-干扰素刺激培养imDC过继治疗抗-GBM肾炎的实验研究

论文摘要

目的:经IFN-γ刺激培养的imDC,过继转入抗-GBM肾炎模型,观察经IFN-γ刺激后的imDC对抗-GBM肾炎肾脏病变的抑制效果。方法:以合成多肽序列pCol （28-40）作为抗原,包入脂质体内制成抗原制剂,建立抗-GBM肾炎大鼠模型,具体为:第0天（d0）脂质体抗原制剂0. 25 ml,于脚掌和尾根部皮下注射初次致敏;第7天（d7）脂质体抗原制剂0. 1 ml,同部位加强致敏;采集wistar大鼠骨髓,采用经典的GM-CSF+IL-4方案制备imDC,经imDCIFN-γ刺激培养,以合成多肽pCol （28-40）多肽作为外源性抗原处理imDCIFN-γ,流式细胞仪检测表面MHC II类分子,及其共刺激分子CD80, CD86和DC表面相对特异性标记OX62的表达情况,在体外与脾脏分离的CD4+T共培养,采用MTT比色法检测CD4+T增殖情况,Annexin-V法检测CD4+T凋亡情况,酶联免疫吸附法检测脾细胞培养液中IL-4、IL-13、IFN-γ的含量,观察体外抗原特异性T细胞功能活性状态;并于首次致敏前7天（-d7）过继转入抗-GBM肾炎模型,间隔7天随机选取相关样本进行生化指标（24小时尿白蛋白,血清肌酐,血尿素氮）肾脏病理学、免疫学指标,病理学、免疫学检查,观察对抗-GBM肾炎肾小球病变抑制效果及抗原特异性免疫耐受的相关机制.结果:（1）光镜下观察imDC IFN-γ细胞呈圆形或卵圆形,细胞膜略不规则,有少量的短小突起或伪足。流式细胞仪检测imDC和imDC IFN-γ表面低表达的MHC II类分子（14.01%）及共刺激分子CD80（4.78%）、CD86（19.79%）,同样低表达DC表面相对特异性标记OX62（ 15.31%）（p<0.05, n=4）的水平都显著低于mDC;（2）抗-GBM肾炎大鼠模型组大鼠尿蛋白,血肌酐,血尿素氮短期内明显升高（P < 0.05,n=10）、HE染色肾小球系膜细胞数增多,炎细胞浸润,PAS染色均有细胞性新月体形成（占肾小囊>50%）、免疫荧光可见大量IgG线样沉积;电镜可见足突融合,基底膜增厚,内皮细胞增生,免疫复合物沉积。（3）体外共培养的脾淋巴细胞,imDC组与对照组增殖无显著性差异;而imDCIFN-γ组与对照组增殖明显受抑制,对照组OD值（0.1950±0.0160.）;imDC组OD值（0.1974±0.017）;imDCIFN-γ组为OD值（0.836±0.012）（p<0.05, n=5）;imDCIFN-γ组凋亡率为（12.98+0.02）,与对照组和imDC组相比凋亡均明显增高（p<0.05, n=5）;上调了Th2型细胞因子IL一4及IL-13的表达,而下调Th1型细胞因子IFN-γ;Th1型细胞因子明显向Th2型细胞因子偏移。进一步体内实验发现,过继转入imDC IFN-γ后均能明显降低尿蛋白,血肌酐,血尿素氮水平,同时期亦减少炎细胞浸润,细胞新月体形成比率和速度减少,免疫荧光检测发现IgG沉积减少,荧光强度减弱;过继转入imDCIFN-γ能够抑制细胞性新月体形成,能明显缓解抗-GBM肾炎病情的进展,对抗-GBM肾炎具有保护作用结论:1. imDC IFN-γ对外源性抗原多肽pCol（28-40）摄取及提呈能力明显下降;可抑制T细胞增殖,促进T细胞凋亡;实验还表明IFN-γ刺激培养的未成熟树突状细胞促使Th1型细胞因子向Th2型细胞因子偏移,诱导形成特异性抗原免疫耐受。2.成功建立了抗-GBM肾炎大鼠模型3. IFN-γ刺激培养的imDC过继转入模型大鼠,可诱导形成抗原特异性免疫耐受,能明显抑制抗-GBM肾炎病情的进展,对抗-GBM肾炎具有保护作用。

论文目录

• 英文缩略词表
• 英文摘要
• 中文摘要
• 论文正文 γ-干扰素刺激培养imDC 过继治疗抗-GBM 肾炎的实验研究
• 前言
• 材料和方法
• 方法
• 结果
• 讨论
• 致谢
• 照片
• 参考文献
• 文献综述 γ－干扰素和C D4+C D2 5+调节性T 细胞抑制抗-GBM 肾炎作用机制探讨
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的文章