论文摘要
目的通过观察二甲双胍对2型糖尿病大鼠心肌组织胶原纤维含量和转化生长因子-β1（TGF-β1）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）表达的影响,探讨二甲双胍对心肌纤维化的保护作用及可能的机制。方法雄性SD大鼠29只,随机取出8只作为正常对照组（NC组）喂以普通饲料。其余21只大鼠喂以高脂饲料,4周后出现胰岛素抵抗[1],将链脲佐菌素（STZ）注射液按30mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射,正常对照组大鼠注射同等剂量的柠檬酸盐缓冲液,每隔4d注射1次,共注射3次,最后一次注射STZ72h后禁食12h,大鼠尾静脉取血用血糖仪测定血糖浓度。血糖≥16.7mmol/L为2型糖尿病模型大鼠。其中19只大鼠成功制成2型糖尿病模型,随机分成2组,即糖尿病组（DM组） 9只、二甲双胍组（MET组）10只。实验期间除正常对照组大鼠给予普通饲料喂养外,其余两组均继续给予高脂饲料喂养。同时MET组用二甲双胍片悬浊液按500mg/（kg.d）剂量灌胃;DM组和NC组每日灌服等体积的生理盐水,灌胃6周。实验末,大鼠禁食12小时称体重,尾静脉取血,用血糖仪测大鼠空腹血糖（FBG）,用10%水合氯醛3mg/kg腹腔注射麻醉,经腹主动脉取血, -70℃保存,以备用酶比色法检测血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）,糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白水平（HbA1c）,放射免疫法检测胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR=FBG×FINS/22.5）。采血完毕迅速处死大鼠,取出心脏,用冰盐水冲洗,剪除包膜、血管,称心脏重量并计算心脏体重比（心脏重量及体重的比值,HW /BW）。垂直于心脏左室长轴对称中点上下切取厚度为23 mm的左室截面,浸泡在10%中性甲醛中, 24 h后石蜡包埋。用HE染色方法在光镜下观察心肌组织形态学变化,用Masson三色染色法检测左室心肌组织中胶原纤维含量,通过免疫组化方法观察心肌组织中TSP-1和TGF-β1的表达量。所得数据用Excel2003建立数据库,用SPSS16.0统计软件包进行统计分析,结果均以x±s表示,各组间数据采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.一般状况及生化指标检测结果:糖尿病组大鼠出现明显的多饮、多食、体重减轻症状。与正常对照组相比,糖尿病组和二甲双胍组大鼠血清中TC、TG和LDL水平明显升高（P<0.05）;与正常对照组相比,糖尿病组大鼠血清中HDL水平明显降低（P<0.05）,二甲双胍组大鼠血清中HDL水平无显著差异（P>0.05）;与糖尿病组相比,二甲双胍组大鼠血清中TC、TG和LDL水平明显降低（P<0.05）,HDL水平明显升高（P<0.05）。2.糖化血红蛋白检测结果:与正常对照组相比,糖尿病组和二甲双胍组大鼠血清中HbA1c水平明显升高（P<0.05）;与糖尿病组相比,二甲双胍组大鼠血清中HbA1c水平明显降低（P<0.05）。3.胰岛素抵抗指数结果:与正常对照组相比,糖尿病组和二甲双胍组大鼠FBG和HOMA-IR明显升高（P<0.05）;与糖尿病组相比,二甲双胍组大鼠FBG和HOMA-IR明显降低（P<0.05）。4.心脏体重比结果:与正常对照组相比,糖尿病组和二甲双胍组大鼠体重明显减轻（P<0.05）,HW /BW明显增加（P<0.05）;与糖尿病组相比,二甲双胍组大鼠体重显著增加（P<0.05）,HW /BW明显减轻（P<0.05）。5. HE染色结果:在光镜下观察心肌细胞的形态变化,正常对照组大鼠心肌细胞排列整齐,致密,无肥大,细胞核呈圆形或椭圆形,胞核明显,无细胞肿胀,细胞外间质较少,可见少量成纤维细胞;糖尿病组大鼠心肌细胞排列紊乱,心肌细胞肥大,扭曲,细胞间隙增大,细胞外基质增多,成纤维细胞增多,并有炎症细胞浸润;二甲双胍组大鼠心肌病理改变有所改善,心肌细胞肥大不多见,细胞边界清楚,细胞核呈圆形或椭圆形。6.Masson染色结果:与正常对照组相比,糖尿病组和二甲双胍组大鼠心肌组织中胶原纤维含量显著增加（P<0.05）;与糖尿病组相比,二甲双胍组大鼠心肌组织中胶原纤维含量显著减少（P<0.05）。7.免疫组化结果:与正常对照组相比,糖尿病组和二甲双胍组大鼠心肌组织中TSP-1、TGF-β1的表达显著增加（P<0.05）;与糖尿病组相比,二甲双胍组大鼠心肌组织中TSP-1、TGF-β1的表达显著减少（P<0.05）。结论1.二甲双胍可以减少2型糖尿病大鼠心肌组织中胶原纤维含量,减轻糖尿病大鼠心肌间质纤维化。2.二甲双胍可以减少2型糖尿病大鼠心肌组织中血小板反应蛋白-1和转化生长因子-β1的表达。