CHD5基因甲基化及叶酸代谢相关基因MTHFR、MS多态与乳腺癌发病的关系

论文摘要

背景与目的DNA甲基化是一种影响基因表达的机制,并与肿瘤发生有着密切的联系,其状态的改变是致癌作用的一个关键因素,也是肿瘤抑癌基因的失活方式之一。叶酸代谢能够为机体发生甲基化提供活性甲基,亚甲基四氢叶酸还原酶（Methylene tetrahydrofolate reductase, MTHFR）与甲硫氨酸合成酶（methionine synthase, MS）是叶酸代谢顺利进行的重要保障因素。本研究探讨MTHFR, MS基因多态性与抑癌基因CHD5甲基化及乳腺癌发病的关系。方法选取原发性乳腺癌患者47例,健康人52例及乳腺良性病变患者15例,采用RT-PCR, DNA甲基化特异性PCR（methylation-sPecific PCR, MSP）聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测CHD5的基因表达、甲基化水平及MTHFR、MS基因多态性。结果CHD5基因的表达量在乳腺癌组织（0.27±0.19）及癌旁组织（0.33±0.17）明显低于乳腺良性病变组织（0.67±0.14）（P<0.05）。CHD5基因甲基化发生率在乳腺癌组织和癌旁组织中分别为48.9%（23／47）和17%（8／47）,两组差异显著（P<0.05）。MTHFR677等位基因T型较C等位基因T型在病例组和对照组分布有显著差异（P<0.05）。携带MTHFR677TT基因型与携带MTHFRCC基因型比较,前者使乳腺癌患病风险增加5.44倍（95%CI,1.91-15.48）。MS2756等位基因G型较等位基因A型在病例组和对照组分布有显著差异（P<0.05）。携带MS 2756AG基因型与携带MS2756AA基因型比较,前者使乳腺癌患病风险增加2.73倍（95%CI,1.42-5.24）。MTHFR677多态性与CHD5基因甲基化无显著关联。MS2756多态性与CHD5基因甲基化有相关性（x2=4.85,P<0.05）。结论CHD5甲基化与乳腺癌发生密切相关,MTHFR、MS多态性可以增加乳腺癌的患病风险,MS多态性可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1.1 乳腺癌组织标本
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验仪器
• 第二章 实验方法
• 2.1 RNA提取与RT=PCR
• 2.1.1 RNA提取
• 2.1.2 RT-PCR检测乳腺组织标本中CHOS基因表达水平
• 2.2 乳腺组织样本甲基化检测
• 2.2.1 乳腺组织样本DNA提取
• 2.2.2 组织DNA的亚硫酸氢化处理
• 2.2.2.1 亚硫酸氢钠修饰基因组DNA
• 2.2.2.2 修饰后DNA纯化回收
• 2.2.3 甲基化特异性PCR
• 2.2.3.1 甲基化特异性PCR的实验前准备
• 2.2.3.2 MSP的扩增体系及产物的电泳检测
• 2.3 MTHFR、MS基因多态性的检测
• 2.4 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3 结果
• 3.1 CHD5基因的mRNA表达
• 3.2 CHD5基因启动子甲基化状况
• 3.3 CHD5基因表达与其甲基化发生的关系
• 3.4 MTHFR、MS多态性与乳腺癌的关联
• 3.5 MTHFR、MS基因型与CHD5发生甲基化的关系
• 第四章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢