雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

论文摘要

雪灵芝（Areneria Kensuensis VarOvatipetala Tsui）又名草灵芝,为高原野生植物,学名卵瓣蚤缀,属石竹科蚤缀属,是多年生垫状草本植物,生长在海拔4000～5000米的高山草甸和石缝中。整个植物体高仅4-5厘米,主根粗壮,下部支根坚韧,枝叶密集于下部,叶成针状线形,长1-2厘米,垫状体直径达到15-20厘米左右。花白色或粉红色,种子繁殖,广泛分布在青藏高原各地,资源十分丰富。雪灵芝是一种传统藏药,以全草入药,性味甘寒,清热解毒,止咳,具有降血压和抗缺氧,能治疗各种肺炎和肺病,具有免疫调节,抑制肿瘤等功效。目前对雪灵芝的抗缺氧作用已有研究报道,但对于脑缺氧缺血损伤的作用还未见报道。本实验选用西藏金珠制药厂制备的全草干粉剂,采用灌喂的方式喂养大鼠,以观察其对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。将Wistar大鼠60只随机分为五组,饲养一周,其中三组每天定时分别灌喂高﹑中﹑低不同浓度的雪灵芝溶液（250mg/kg,500mg/kg,1000mg/kg）,给药容积为5 mL/kg体质量,假手术组和对照组每天定时灌喂等容量的生理盐水。第八天给大鼠做颈总动脉结扎手术。结扎颈总动脉前再次分别灌喂不同浓度的雪灵芝溶液。1小时后麻醉大鼠,采用线栓法结扎大鼠双侧颈总动脉,造成大鼠脑缺血再灌注损伤模型。缺血30min,再灌注2小时。然后断头取脑,观察雪灵芝对大鼠脑组织中的相关生化指标的影响,以及脑含水量。实验结果显示,缺血再灌注造成脑组织严重损伤。脑组织中,丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）及脑含水量较假手术组明显增高,而超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、ATP酶较对照组降低,而雪灵芝各剂量组可降低对照组脑含水量,降低脑组织中MDA、LDH、NO含量,升高SOD、GSH-Px、ATP酶活力。结果表明:雪灵芝对脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用,并提示其机制可能是通过有效地抵抗自由基作用、减轻氨基酸的神经毒性、降低线粒体的作用来实现。本研究为雪灵芝应用于脑缺血性疾病的临床预防和治疗提供了初步的实验依据,为中药治疗脑缺血性疾病开辟了一个新的思路。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 1 文献综述
• 1.1 脑缺血的能量耗竭、代谢异常
• 1.2 兴奋性氨基酸毒性与脑缺血再灌注损伤
• 1.2.1 EAAs 在脑缺血时的变化
• 1.2.2 EAAs 在脑缺血中的损伤作用
• 1.2.3 EAAs 与脑缺血预适应
• 1.3 ATP 酶与脑缺血再灌注损伤
• +-K⁺-ATP 酶的一般性质'>1.3.1 Na⁺-K⁺-ATP 酶的一般性质
• +-K⁺-ATP 酶的功能'>1.3.2 Na⁺-K⁺-ATP 酶的功能
• +-K⁺-ATP 酶的调节'>1.3.3 Na⁺-K⁺-ATP 酶的调节
• +-K⁺-ATP 酶与脑缺血再灌注损伤'>1.3.4 Na⁺-K⁺-ATP 酶与脑缺血再灌注损伤
• 2+-ATP 酶与脑缺血再灌注损伤'>1.3.5 Ca²⁺-ATP 酶与脑缺血再灌注损伤
• 1.4 氧自由基损伤
• 1.4.1 自由基的概念及来源
• 1.4.2 脑缺血再灌注时氧自由基产生的主要途径
• 1.4.3 氧自由基造成脑缺血再灌注的机制
• 1.5 炎性细胞因子损害
• 1.5.1 黏附分子
• 1.5.2 细胞因子
• 1.5.3 与脑缺血再灌注损伤相关的免疫细胞
• 1.6 凋亡（apoptosis）
• 1.6.1 脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的机制
• 1.6.2 其他因素
• 1.6.3 中医药对脑缺血再灌注凋亡基因的研究
• 1.7 一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）与脑缺血再灌注损伤
• 1.7.1 脑缺血再灌注时 NO 的产生
• 1.7.2 NO 参与脑缺血再灌注损伤的机制
• 1.8 结束语
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 药品与试剂
• 2.3 实验仪器
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 分组及给药方法
• 2.4.2 脑缺血30 分钟再灌注2 小时损伤模型的建立
• 2.4.3 脑组织匀浆的制备
• 2.4.4 脑含水量的测定
• 2.4.5 生化指标的测定
• 2.5 统计学分析
• 3 实验结果及分析
• 3.1 雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注后脑组织含水量的影响
• 3.2 雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注后脑组织 GSH-Px 和 MDA 的影响
• 3.2.1 各组 GSH-Px 活性相关结果分析
• 3.2.2 各组 MDA 含量相关结果分析
• 3.3 雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注后脑组织 NO 及 NOS 的影响
• 3.3.1 各组大鼠脑组织NO 含量相关结果分析
• 3.3.2 各组大鼠脑组织NOS 含量相关结果分析
• 3.4 雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注后脑组织 SOD 的影响
• 3.5 雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注后脑组织 LDH 的影响
• 3.6 雪灵芝对大鼠脑缺血再灌注后脑组织各种 ATP 酶的影响
• 4 讨论
• 4.1 雪灵芝的开发研究
• 4.1.1 雪灵芝的药用沿革
• 4.1.2 雪灵芝的化学成分研究
• 4.1.3 雪灵芝药理、药效学试验
• 4.2 实验方法的讨论
• 4.2.1 选用结扎双侧颈总动脉制作大鼠脑缺血再灌注模型的原因分析
• 4.2.2 在脑缺血30 分钟后进行生化检测的原因分析
• 4.3 实验相关结果的讨论
• 4.3.1 氧自由基与脑缺血再灌注损伤
• 4.3.2 脑水肿，脑梗死和ATP 酶活性变化的相关讨论
• 4.3.3 NO 和 NOS 与脑缺血再灌注损伤
• 4.4 实验结果的现实意义
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 在校期间科研成果