靶向survivin基因siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响

论文摘要

目的:观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞株Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法:使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测survivin-siRNA对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响;转染survivin-siRNA后,RT-PCR检测喉癌细胞株Hep-2 survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞株Hep-2凋亡情况。结果:各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组（P<0.05）,survivin mRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降。结论:利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞株Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度survivin-siRNA转染能下调survivin mRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 仪器
• 1.1.4 SiRNA
• 1.2 方法
• 1.2.1 喉癌细胞株及其培养
• 1.2.2 SiRNA 的转染
• 1.2.3 MTT 法检测转染后对喉癌细胞株Hep-2 增殖的抑制作用
• 1.2.4 RT-PCR 检测survivin 基因m RNA 的表达
• 1.2.5 Western blot 法检测各组细胞survivin 蛋白表达
• 1.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡情况
• 1.3 统计分析
• 2 结果
• 2.1 SiRNA 对人喉癌细胞株Hep-2 细胞的抑制作用
• 2.2 SiRNA 对survivin 基因m RNA 表达的抑制作用
• 2.3 SiRNA 转染Hep-2 细胞后survivin 蛋白表达变化
• 2.4 SiRNA 诱导人喉癌细胞株Hep-2 细胞自发凋亡的作用
• 3 讨论
• 参考文献
• 附录A 综述
• 参考文献
• 附录B 细胞培养知识总结
• 在学研究成果
• 致谢