防御素Defcr4和Mcp-1基因在牛乳腺中表达的研究

论文题目: 防御素Defcr4和Mcp-1基因在牛乳腺中表达的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 肖安东

导师: 张玉静

关键词: 防御素,乳腺表达

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 哺乳动物防御素是近年来发现的广泛存在于哺乳动物体内的一类阳离子多肽,不仅具有广谱抗微生物作用,而且还能杀伤多种肿瘤细胞,其潜在的药用价值巨大。本研究利用基因工程原理及现代分子生物学实验技术,通过合成和反转录分别克隆了鼠小肠隐窝防御素Defcr4 cDNA 和兔巨噬细胞防御素Mcp-1 cDNA,构建了防御素牛乳腺特异性表达载体pBC1-neo-Defcr4 和pBC1-neo-Mcp-1,并分别在牛乳腺中进行了表达实验。结果显示pBC1-neo-Defcr4 质粒在牛乳腺中得到正确表达,经反相高效液相色谱法分离,在牛乳汁中纯化出具有抗菌活性的Defcr4,并经质谱分析确认其分子量与理论值相符。证明本实验构建的牛乳腺特异性表达载体pBC1-neo-Defcr4 是合理有效的,为进一步构建防御素牛乳腺生物反应器和防御素的研究与应用奠定了基础。

论文目录:

前言

第一篇:文献综述

第一章 哺乳动物防御素研究进展及应用前景展望

1 哺乳动物防御素的产生与分子构形特点

2 防御素的基因表达与生物合成

3 哺乳动物防御素的生物学活性

4 哺乳动物防御素在医学与农牧业上的应用前景

第二章 动物乳腺生物反应器研究及应用进展

1 乳腺生物反应器及其原理

2 乳腺生物反应器的构建

3 外源基因乳腺表达方法

4 乳腺生物反应器的优势与应用

5 乳腺生物反应器存在的主要问题

6 乳腺生物反应器的应用前景

第二篇:研究内容

第一章 鼠小肠隐窝防御素 Defc14 基因的合成、克隆与测序

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 pGEM-Dec14 载体构建图

2.2 合成基因片段连接后琼脂糖凝胶电泳结果

2.3 重组质粒pGEM-Defc14 的PCR 鉴定

2.4 重组质粒pGEM-Defc14 的酶切鉴定

3 讨论

4 小结

第二章 兔巨噬细胞防御素 Mcp-1 基因的克隆与测序

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 pGEM-Mcp-1 载体构建图

2.2 RT-PCR 结果

2.3 RT-PCR 回收产物序列测定

2.4 重组质粒pGEM-MCP-1(含牛β-酪蛋白信号肽序列)的PCR 鉴定

2.5 重组质粒pGEM-MCP-1(含牛β-酪蛋白信号肽序列)的酶切鉴定

2.6 重组质粒pGEM-MCP-1(含牛β-酪蛋白信号肽序列)序列测定

3 讨论

4 小结

第三章 防御素真核表达载体的构建

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 pBC1-Neo 载体构建策略

2.2 pGEM-T-neo 质粒 PCR 和单酶切鉴定

2.3 重组质粒pGEM-T-Neo 的核苷酸测序结果

2.4 pBC1-Neo 质粒PCR、单酶切和正反向鉴定

2.5 pBC1-Neo-Defc14 和pBC1-Neo-Mcp-1 载体构建策略

2.6 pBC1-neo-Defcr4 进行 PCR、单酶切和正反向鉴定

2.7 pBC1-Neo-Mcp-1 PCR 和单酶切鉴定

2.8 pBC1-Neo-Defc14 和pBC1-Neo-Mcp-1 正反向鉴定

3 讨论

4 小结

第四章 防御素 Defc14 和 Mcp-1 基因在牛乳腺中的瞬时表达

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 牛奶中抗菌活性物的测定结果

2.2 牛奶中防御素(Defc14)梯次 RP-HPLC 分离纯化结果

2.3 防御素表达量的时效变化

2.4 防御素提取物的 SDS—PAGE 电泳结果

3 讨论

4 小结

第五章 牛奶中 Defc14 防御素的分离、纯化与液质谱分析

1 材料

2 方法

3 结果

3.1 牛奶第一次 RP—HPLC 分离结果

3.2 牛奶第二次 RP—HPLC 分离结果

3.3 提取液抗菌活性检测结果

3.4 提取纯化物的紫外光谱扫描结果

3.5 提取物纯化物的液相一质谱联用仪分析结果

4 讨论

5 小结

结论

参考文献

中文摘要

英文摘要

致谢

发布时间: 2005-08-26

参考文献

• [1].人α防御素5的基因工程制备及其抗几种病原微生物的活性研究[D]. 王艾平.第三军医大学2008
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