论文题目: HOXA5基因在人类乳腺癌发病机制和治疗中的意义
论文类型: 博士论文
论文专业: 肿瘤学
作者: 曾郁
导师: 朱雄增,杨文涛,陈忠伟
关键词: 乳腺癌,基因,甲基化,蛋白表达,免疫组化
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的研究乳腺癌组织和乳腺癌细胞中HOXA5基因表达，探讨其表达异常的发生机制及其临床病理和治疗意义。方法第一部分1、采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction，Real-time RT-PCR)技术，检测60例新鲜乳腺癌组织及24例良性乳腺病变中HOXA5mRNA表达。2、分析HOXA5mRNA表达与乳腺癌临床病理资料间的相关性。第二部分1、甲基化特异性PCR(methylation specific PCR，MSP)法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、SKBR3、MCF7中HOXA5基因启动子区CpG岛甲基化状态；Real-time RT-PCR方法检测上述3株细胞HOXA5 mRNA表达。2、DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-deoxycytidine，5-Aza-CdR)处理MDA-MB-231细胞，Real-time RT-PCR方法检测药物作用后HOXA5mRNA表达变化；MSP法检测5-Aza-CdR处理后MDA-MB-231 HOXA5基因甲基化状态的变化，探讨甲基化与乳腺癌HOXA5基因表达的关系。3、半定量RT-PCR方法比较DNA甲基转移酶DNMT1mRNA在MDA-MB-231、MCF7细胞中的表达量，初步探讨HOXA5基因异常甲基化的发生机制。4、甲基化特异性PCR法检测60例乳腺癌组织以及12例良性乳腺病变中HOXA5基因启动子区CpG岛甲基化状态，探讨甲基化与HOXA5mRNA表达的关系以及与乳腺癌临床病理资料间的相关性。第三部分1、免疫组化技术检测乳腺癌及良性乳腺病变中HOXA5蛋白表达，研究HOXA5基因甲基化与蛋白表达的关系，初步探讨其临床病理意义。2、免疫组化技术检测孕激素受体(PR)蛋白表达，探讨HOXA5蛋白表达与PR蛋白表达的关系。结果第一部分1、HOXA5 mRNA在乳腺癌中相对表达量0.73～193.07，均值为20.85，乳腺良性病变中相对表达量5.42～81.91，均值为30.94；乳腺癌HOXA5mRNA表达明显低于乳腺良性病变(p=0.001)。2、淋巴结转移阳性乳腺癌HOXA5 mRNA表达明显低于淋巴结转移阴性组，两者间有显著差异(p＜0.05)。HOXA5 mRNA表达与乳腺癌肿瘤大小、临床分期、组织学分型、浸润性导管癌分级以及患者年龄未见相关性(p＞0.05)。第二部分1、MDA-MB-231、SKBR3 HOXA5基因启动子区CpG岛是甲基化的，而MCF7呈未甲基化状态；甲基化的MDA-MB-231、SKBR3细胞HOXA5 mRNA表达沉默，而未甲基化的MCF7细胞有HOXA5mRNA表达。2、DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能诱导MDA-MB-231细胞重新表达HOXA5mRNA，HOXA5mRNA表达与5-Aza-CdR用量有时间和剂量依赖关系。3、5-Aza-CdR能使MDA-MB-231细胞部分去甲基化。5-Aza-CdR处理后MDA-MB-231 HOXA5基因高甲基化状态可得到部分逆转。4、MDA-MB-231细胞DNMT1mRNA表达高于MCF7细胞(p＜0.05)。5、55例乳腺癌HOXA5基因启动子区CpG岛甲基化，甲基化阳性率为91.7％(55／60)。乳腺病和导管内乳头状瘤HOXA5均为未甲基化状态。3例纤维腺瘤中2例呈部分甲基化，1例为未甲基化。乳腺癌和良性乳腺病变HOXA5基因甲基化阳性率有显著差异(p＜0.001)，HOXA5基因甲基化具有肿瘤特异性。6、HOXA5基因甲基化乳腺癌病例HOXA5mRNA表达比未甲基化病例低，两者有显著差异(p＜0.05)。7、淋巴结转移阳性组乳腺癌HOXA5甲基化阳性率明显高于无淋巴结转移组(p＜0.05)，HOXA5基因甲基化可能与淋巴结转移有关；HOXA5基因甲基化与患者年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、TNM分期以及乳腺癌病理分型无相关性(p＞0.05)。第三部分1、HOXA5蛋白主要定位于细胞浆、可见于细胞膜，部分病例核旁胞浆HOXA5蛋白强染色。2、正常乳腺上皮和肌上皮HOXA5蛋白均为强阳性染色。乳腺病、导管内乳头状瘤HOXA5蛋白强阳性表达，纤维腺瘤弱阳性表达。44例(44／46)乳腺癌HOXA5蛋白表达呈不同程度的减少或消失。3、乳腺癌HOXA5基因甲基化与蛋白表达减少有相关性(p=0.014)。4、淋巴结转移阳性和阴性乳腺癌，HOXA5蛋白表达有显著差异(p=0.001)。HOXA5蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、TNM分期、乳腺癌组织学分型等其它临床病理学参数间未见统计学差异(p＞0.05)。5、此次实验PR蛋白阳性率为43.5％；未显示HOXA5和PR蛋白表达有相关性(p＞0.05)。结论1、乳腺癌组织HOXA5mRNA表达明显低于良性乳腺病变。HOXA5mRNA表达减少可能与乳腺癌淋巴结转移有关。2、乳腺癌细胞MDA-MB-231 HOXA5mRNA表达抑制与该基因启动子区CpG岛过度甲基化有关。3、DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷能诱导MDA-MB-231重新表达HOXA5mRNA，5-氮-2’-脱氧胞苷可部分逆转MDA-MB-231 HOXA5基因高甲基化状态。4、91.7％(55／60)乳腺癌组织中HOXA5基因启动子区CpG岛呈高甲基化状态。HOXA5mRNA表达减少与HOXA5基因启动子CpG岛过度甲基化有关。HOXA5基因过度甲基化可能与乳腺癌淋巴结转移有关。5、乳腺癌HOXA5蛋白表达明显降低，HOXA5基因甲基化与蛋白表达减少有关，HOXA5蛋白表达减少可能与乳腺癌淋巴结转移有关。6、本次研究未显示HOXA5与PR蛋白表达有相关性。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
引言
参考文献
第一部分 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测乳腺癌HOXA5mRNA表达
正文
参考文献
第二部分 乳腺癌HOXA5基因启动子甲基化与基因表达的关系
正文
参考文献
第三部分 HOXA5基因启动子甲基化与HOXA5蛋白表达的关系
正文
参考文献
总结
附录
综述
正文
参考文献
攻读博士学位期间撰写的论文题录
致谢
发布时间: 2007-06-28
参考文献
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