CaN Aβ mRNA基因沉默对醛固酮诱导的心肌细胞肥大的抑制作用

论文摘要

背景与目的:心肌肥大是多种心血管疾病的共同病理过程,是导致心原性死亡的最重要的病理基础之一。近年来,神经体液因素尤其是肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）失调所造成的心肌肥大越来越受到重视。现已发现,醛固酮是心肌肥大的重要诱导因素。研究表明,CaN依赖的信号通路可能在心肌肥大的发生发展中起重要作用。目前在心肌肥大的发生机制的研究上,有人应用RNAi技术在培养的心肌细胞上研究有关肥大的相关基因,但目前尚无直接针对CaN进行RNAi的研究。我们认为针对CaN致心肌肥大的瓶颈作用,通过RNAi技术,进行深入研究具有重要意义。本课题在培养的原代大鼠心肌细胞上,在醛固酮等引起心肌细胞肥大的刺激因素作用下,同时应用CaN的特异性抑制剂—环孢霉素A（cyclosporin A, CsA）及醛固酮受体拮抗剂螺内酯,通过测定细胞大小、肥大相关基因ANF及β-MHC表达、CaN基因表达及蛋白表达水平,进一步观察CaN在醛固酮刺激引起的心肌细胞肥大中的重要作用。应用siRNA特异性引起CaN AβmRNA的基因表达沉默,通过测定CaN mRNA及其蛋白表达水平观察所选择的siRNA片段所引起的RNAi的效果,从而更能明确CaN AβmRNA的功能片段所在位置。 方法:取1-3d龄Wistar乳鼠心肌细胞进行培养。实验分组:醛固酮组:每孔加入醛固酮10-9mol/L;空白对照组:不加任何处理因素,与加入处理因素的组别共同进行换液处理;靶标siRNA组:每孔除加入醛固酮10-9mol/L外,另外予以细胞2μl/孔针对CaN Aβ mRNA的能在细胞内表达siRNA的DNA表达盒进行转染;靶标siRNA阴性对照

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 正文
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物与动物分组
• 1.2 主要仪器
• 1.3 主要试剂
• 1.4 新生小鼠心肌细胞的分离和培养
• 1.5 SIRNA的U6盒DNA的制备
• 1.6 转染细胞
• 1.7 细胞活力测定
• 1.8 心肌细胞表面积确定以测定细胞大小变化
• 1.9 免疫组织化学：SP-ABC法
• 1.10 细胞爬片免疫荧光染色
• 1.11 RNA提取方法及RT-PCR过程
• 1.12 统计学分析
• 2 结果
• 2.1 各组心肌细胞活力测定
• 2.2 心肌细胞心肌肥大相关指标测定
• 2.2.1 各组心肌细胞表面积测定
• 2.2.2 各组心肌细胞心肌肥大相关基因mRNA相对定量
• 2.2.3 各组大鼠心肌细胞α—actin免疫荧光染色比较
• 2.3 各组大鼠心肌细胞CAN MRNA及其蛋白表达测定
• 2.3.1 各组大鼠心肌细胞CaN mRNA相对定量
• 2.3.2 各组大鼠心肌细胞CaN Aβ免疫组化比较
• 2.3.3 各组大鼠心肌细胞CaN Aβ免疫荧光染色比较
• 3 讨论
• 3.1 醛固酮可造成心肌细胞肥大
• 3.2 CAN信号分子参与了醛固酮诱导的心肌细胞肥大
• 3.3 应用SIRNA干扰CAN ABMRNA表达抑制心肌细胞肥大的发生
• 3.4 螺内酯预防心肌肥大的临床应用及其意义
• 4 结论
• 5 存在的问题
• 参考文献
• 文献综述
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢