农杆菌介导油菜转双价抗虫基因的研究

论文摘要

油菜属于十字花科芸苔属植物,在生长期间常受到鳞翅目等虫害的危害,造成严重的减产。常规的化学防治因为农药残留会对环境及人类的健康造成很大的危害。目前,作物转基因抗虫育种因其具有不受物种限制、高效、快速和准确性高等优点而备受育种工作者的青昧。本研究系统分析了影响农杆菌介导法油菜转基因技术的相关因素。结果表明:苗龄为6-7d的子叶柄的分化率最高,更适合作农杆菌的转化材料;农杆菌感染子叶柄的时间应为5min,这样不仅分化率高,而且褐化现象不严重。从抗生素对农杆菌的抑制和对油菜子叶、下胚轴分化的影响两方面考虑,确定了羧卞青霉素的适宜浓度为500mg/L,卡那霉素的筛选浓度为15mg/L。加之预培养、共培养以及诱导培养基的选择,建立了较为完善的转化体系。 以甘蓝型油菜（Brassica Napus）晋4、H165的子叶、下胚轴作为外植体,用农杆菌介导的转化法将双价抗虫基因bmk和chi导入油菜,获得16株转基因植株。经PCR检测,初步证明双价抗虫基因已整合到受体基因组中。获得T0代转基因植株形态正常,并且已开花结籽,其它生物学鉴定正在进行之中。

论文目录

• 摘要
• 第一部分 前言
• 一、组织培养技术的研究
• 二、油菜传统育种的现状及基因工程的应用
• 三、作物转基因育种及抗虫育种中存在的问题
• 四、转基因植物的抗虫机理
• 五、植物转基因技术
• 六、本研究的立题依据及意义
• 第二部分 材料和方法
• 一、试验材料
• 二、实验仪器
• 三、试验方法
• 第三部分 结果与分析
• 1 苗龄对油菜下胚轴分化的影响
• 2 不同外植体分化频率的研究
• 3 不同预培养时间对油菜下胚轴分化率的影响
• 4 不同外植体对卡那霉素的耐受性分析
• 5 共培养时间对转化效果的影响
• 6 菌液浓度、侵染时间对转化的影响
• 7 不同抗生素的抑菌效果比较
• 8 羧卞青霉素对油菜子叶外植体再生的影响
• 9 影响外植体褐化的因素
• 10 转基因再生植株的获得及分子检测
• 第四部分 讨论与结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 附录