论文题目: β-榄香烯衍生物抗肿瘤活性体外筛选及XLY19抗肿瘤作用研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 药理学
作者: 王宪明
导师: 王敏伟
关键词: 榄香烯,衍生物,抗肿瘤活性,细胞凋亡
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文采用人癌细胞体外培养模型对β-榄香烯衍生物的抗肿瘤活性进行了初步筛选，主要研究活性衍生物XLY19的体内、体外抗肿瘤作用，初步探讨其作用机制。体外筛选实验结果表明大多数β-榄香烯衍生物对Hela、SGC-7901及HL-60细胞的体外增殖有显著抑制作用，IC50明显低于β-榄香烯。重复实验和小鼠骨髓细胞毒性实验表明，XLY19、XLY98、XLY2、XLY6、XLY49、XLY57值得作进一步研究。荷瘤小鼠体内实验表明，XLY19以25、50、100mg·kg-1·d-1处理移植H22和S180小鼠7天，能显著抑制肿瘤生长。H22各剂量组平均肿瘤抑制率（3次实验）分别为25.30％、40.85％、52.15％。S180各剂量组平均肿瘤抑制率（2次实验）分别为18.72％、35.53％和55.94％。体外SRB法分析表明，XLY19对HL-60、Hela、SGC-7901、BEL-7402和HepG2细胞均具有明显的细胞毒活性，抑制细胞生长呈时间和剂量依赖性。IC50分别为16.36±0.59、23.21±2.11、26.73±3.82、41.15±1.21、32.27±3.21μmol·L-1。小鼠脾淋巴细胞体外增殖实验表明，XLY19剂量低于7.5μmol·L-1促进增殖，高于15μmol·L-1抑制增殖。荷瘤小鼠碳粒廓清实验表明，XLY19中剂量(50 mg·kg-1·d-1)显著促进小鼠碳粒廓清（p＜0.05），高(100 mg·kg-1·d-1)和低(25mg·kg-1·d-1)剂量促进碳粒廓清无显著性（p＞0.05）。光学显微镜和荧光显微镜观察XLY19处理的SGC-7901和Hela细胞，可见细胞体积变小，细胞核皱缩致密，随着药物作用时间的增加，细胞核缩小成斑块状。琼脂糖凝胶电泳法检测XLY19对肿瘤细胞DNA的影响，显示细胞凋亡特异性DNA梯状带。流式细胞仪分析表明，XLY19可将肿瘤细胞阻滞于G0／G1期，随时间延长或剂量增加DNA直方图上可见渐强SubG1峰。综合上述实验结果，证实XLY19具有诱导肿瘤细胞凋亡的活性，同时也具有细胞周期阻滞作用。进一步研究发现XLY19抑制肿瘤细胞增殖活性可被caspase家族抑制剂和caspase-3抑制剂显著抑制，XLY19可显著上调细胞内caspase-3活性。推测XLY19诱导肿瘤细胞凋亡与活化caspase-3有关。本论文首次证明结构不同于β-榄香烯羟基衍生物，含氮衍生物和金属络合物的XLY19具有体内、体外抗肿瘤活性，并证明诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤机制之一，推测其诱导肿瘤细胞凋亡与上调caspase-3活性有关，为今后XLY19开发成抗肿瘤新药奠定基础。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
第一章 序言
1.1 肿瘤的危害与药物治疗
1.2 抗肿瘤药发展趋势
1.3 β-榄香烯(β-ELEMENE)研究进展
1.3.1 β-榄香烯的体内、体外抗肿瘤作用
1.3.2 β-榄香烯的抗肿瘤机制
1.4 本课题研究的背景及意义
第二章 β-榄香烯衍生物抗肿瘤活性体外筛选
2.1 实验材料
2.1.1 药品与试剂
2.1.2 试剂及样品液配制
2.1.3 细胞系
2.1.4 实验动物
2.1.5 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养与传代
2.2.2 SRB法检测β—榄香烯衍生物体外抗肿瘤活性
2.2.3 正常小鼠骨髓细胞体外培养法检测XLY19等10个衍生物的毒性
2.3 实验结果
2.3.1 β—榄香烯衍生物对Hela、SGC-7901、HL-60细胞体外增殖的影响
2.3.2 XLY19等衍生物三次独立重复实验结果
2.3.3 XLY19等衍生物对小鼠骨髓细胞的毒性
2.4 讨论
2.4.1 构效关系探讨
2.4.2 筛选结果分析
第三章 XLY19抗肿瘤作用研究
3.1 实验材料
3.1.1 药品与试剂
3.1.2 试剂及样品液配制
3.1.3 细胞系
3.1.4 实验动物
3.1.5 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 XLY19体外抗肿瘤实验
3.2.1.1 XLY19对多种人癌细胞体外增殖的影响
3.2.1.2 SRB法检测XLY19体外作用量效关系
3.2.1.3 SRB法检测XLY19体外作用的时效关系
3.2.2 小鼠移植性肿瘤体内实验
3.2.3 XLY19对小鼠免疫功能的影响
3.2.3.1 小鼠脾淋巴细胞体外增殖实验
3.2.3.2 荷瘤小鼠碳粒廓清实验
3.2.4 XLY19诱导肿瘤细胞凋亡活性的研究
3.2.4.1 活细胞形态学观察
3.2.4.2 细胞核荧光染色观察
3.2.4.3 DNA提取和DNA片断化分析
3.2.4.4 流式细胞术检测XLY19对细胞周期的影响
3.2.4.5 Caspase抑制剂对XLY19抑制肿瘤细胞增殖的影响
3.2.4.6 Caspase-3活力测定
3.3 统计处理
3.4 实验结果
3.4.1 XLY19对体外人癌细胞生长的影响
3.4.2 XLY19体外抑制肿瘤细胞增殖的量效性和时效性
3.4.3 XLY19对荷瘤小鼠体内肿瘤生长的影响
3.4.4 XLY19对小鼠免疫功能的影响
3.4.5 XLY19诱导肿瘤细胞凋亡
3.4.5.1 形态学观察及DNA电泳
3.4.5.2 XLY19对肿瘤细胞细胞周期的影响
3.4.5.3 Caspase蛋白酶抑制剂对XLY19诱导肿瘤细胞凋亡的影响
3.4.5.4 XLY19对caspase-3活性的影响
3.5 讨论
结论
参考文献
缩略词表
致谢
发布时间: 2006-12-14
参考文献
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