新疆几种大型真菌的分类鉴定及其生物学特性研究

论文摘要

本研究在对新疆五株特有大型真菌进行形态学、解剖学、生长环境等的观察基础上,利用物种核糖体rDNA的基因间区ITS和D1/D2区的序列,并与国际核酸数据库GenBank、EMBL、DDBJ、GSDB中已提交的相似物种的核酸序列进行BLAST比对,确定测序物种与其最近缘种的同源性来判断物种的归属,同时,运用CLUSTALW1.6软件比对所有近似物种,构建系统发生进化树,采用数值分类法进一步确定物种的归属。其中对一株国内新记录种进行了生物学特性的综合探究。实验结果归结如下:1、传统形态学分类法将菌株XJURML-4和XJURML-5鉴定为“美味羊肚菌”和“粗腿羊肚菌”。然而,两菌ITS区序列的BLAST比对和系统发生进化树一致将两菌鉴定为宽圆羊肚菌（M. esculenta）,同时两菌的RAPD分型条带也显示二者基因组结构上有差异。这表明XJURML-4和XJURML-5是宽圆羊肚菌（M. esculenta）种内的两个不同地理分离株。两菌GenBank检索号为:EU086775和EU086776。2、菌株XJURML-11的形态特征与铦囊蘑菌类似,扩增其28S rRNA的D1/D2序列显示其与黑白銛囊蘑菌（Melanoleuca melaleuca）最为接近,同源性为97.79%。形态特征和分子特征将菌株XJURML-11鉴定为黑白銛囊蘑菌（Melanoleuca melaleuca）,GenBank检索号EU621790。3、据菌株XJURML-12的形态特征,初步鉴定其为“墨汁鬼伞”。扩增XJURML-12的ITS区和28S rRNA的D1/D2区,但ITS区双向测序结果不能顺利拼接,单端序列BLAST比对显示其与Coprinus rhizophoru （syn. Coprinopsis strossmayeri）的同源性最高。而28S rRNA的D1/D2区序列在数据库中没有参照序列,基于两扩增片段来自同一物种,提交完全拼接的28S rRNA的D1/D2的序列,GenBank检索号EU621791。4、菌株XJURML-3的形态特征与国际唯一报道种Emericellopsis pallida strain CBS 624.73 （AY632667）最为接近,两菌ITS区序列同源性为98.33%,将XJURML-3鉴定为Emericellopsis pallida（灰白翅孢壳）,是该物种的一新分离株。GenBank检索号EU045572,菌株在中国典型培养物保藏中心保藏号为:CCTCC AF 207025。5、通过菌株XJURML-3（Emericellopsis pallida,灰白翅孢壳）的培养特征、发酵特征来揭示其生物学特性。单因子法确定影响发酵培养的主要因素为蔗糖、稻草浸汁、氯化铵。响应面法二次优化,中心组合实验分析得出XJURML-3（灰白翅孢壳）发酵产胞外多糖的最佳组合为:蔗糖为59.5g/l,稻草浸汁为20g/l,氯化铵为2g/l时,最大产胞外多糖为1.5g/l。试验发现灰白翅孢壳对稻草浸汁利用较好,对提高再生资源的利用,降低发酵成本有现实意义。响应面法是一个比单因子法更加有效的优化技术,但必须辅以单因子法。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 新疆地貌特点与微生物分布
• 2 新疆大型真菌的研究历史与现状
• 3 现代分子分类法鉴定大型真菌的可行性
• 3.1 真菌分子系统学的产生
• 3.2 现代分子分类法概述
• 3.3 核酸序列分析
• 3.4 本次实验中分子鉴定研究所涉及的5 种大型真菌
• 第二章 五株大型真菌的分类学鉴定
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 供试菌株
• 2.2 供试菌株实物原图
• 2.3 采集样品的预处理
• 2.4 大型真菌子实体或者菌丝体基因组DNA 的提取（改良法）
• 2.5 rDNA ITS 区或D1/D2 区片段的PCR 扩增
• 3 大型真菌的分类鉴定
• 3.1 两株羊肚菌的分类鉴定
• 3.2 銛囊蘑菌的分类鉴定
• 3.3 鬼伞菌的形态观察与分类鉴定
• 3.4 马鞍菌子实体伴生菌的分类鉴定
• 第三章 XJURML-3 生物学特性研究
• 1 引言
• 2 形态的培养方法与特征
• 2.1 形态的培养方法
• 2.2 培养特征
• 3 发酵特征
• 3.1 试验材料
• 3.2 方法
• 3.3 种子培养基优化
• 3.4 菌丝体发酵培养基及培养条件的选择
• 结论与展望
• 参考文献
• 附录
• 1 缩写表
• 2 主要试剂
• 3 主要仪器设备
• 攻读硕士学位期间发表的论文和摘要情况
• 在读期间所发论文和投稿
• 已发表的会议论文和摘要
• 已取得的成绩
• 致谢