人瘢痕疙瘩中CASK、Id1表达的研究及青蒿琥酯对其表达的影响

论文摘要

目的为了证实CASK和Id1与瘢痕疙瘩的形成存在关系,首先应用免疫组织化学法观察正常皮肤和瘢痕疙瘩组织中CASK和Id1的表达差异,然后进一步应用免疫细胞化学法和Western blotting法观察体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中CASK和Id1的表达,并观察在青蒿琥酯干预作用后CASK和Id1的表达变化,为从CASK和Id1信号通路研究瘢痕疙瘩细胞增殖调控发生机理提供理论基础,探讨青蒿琥酯抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用机理。方法（1）收集临床手术切除的瘢痕疙瘩组织15例和正常皮肤组织14例,采用免疫组化SP法研究CASK和Id1在瘢痕疙瘩组织和正常皮肤组织中的表达及差异。（2）采用组织块贴壁法进行瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养,成功培养出14例,使用含10%胎牛血清的DMEM培养液,37℃,5%CO2,饱和湿度下培养。将10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L的青蒿琥酯与其共同培养一段时间后,采用MTT计数法筛选Dm值,再按其Dm设计实验组。观测瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养组（对照组）和青蒿琥酯干预作用组（处理组）瘢痕疙瘩成纤维细培养生长曲线、分裂指数,并采用免疫细胞化学法观测两组瘢痕疙瘩成纤维细胞中CASK和Id1蛋白的表达情况,采用Western blotting法检测两组CASK和Id1蛋白的表达变化。结果（1）在14例瘢痕疙瘩组织细胞中CASK和Id1阳性表达分别是26.7%和80.0%。正常皮肤组织中CASK和Id1阳性表达分别是75.0%和25.0%。CASK阳性表达在瘢痕疙瘩组织中低于正常皮肤组织,Id1阳性表达在瘢痕疙瘩组织中高于正常皮肤组织,两组比较有显著性差异（P<0.05）。（2）对照组和处理组瘢痕疙瘩成纤维细培养比较,显示青蒿琥酯对瘢痕疙瘩成纤维细胞有明显的生长抑制作用,其作用特点呈浓度依赖性,其IC50为60mg/L。青蒿琥酯呈剂量及时间依赖性地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,青蒿琥酯使生长曲线不同程度的压低、分裂指数下降,光镜下细胞突起变短,细胞由梭形变成椭圆形,核固缩、碎裂。（3）青蒿琥酯作用24h后,采用免疫细胞化学法检测发现瘢痕疙瘩成纤维细胞中的CASK表达增加,Id1表达减少;采用Western blotting法发现,青蒿琥酯作用前CASK蛋白条带和Id1蛋白条带与β-actin蛋白条带的比值分别为1.073±0.047和1.421±0.051,作用后CASK和Id1分别为1.352±0.052和0.984±0.064,青蒿琥酯作用前后CASK和Id1的表达水平有显著差别(P<0.05=。结论（1）免疫组织化学法表明正常皮肤和瘢痕疙瘩组织中CASK和Id1的表达差异,提示CASK和Id1的表达变化与在瘢痕疙瘩的形成有关,这对后续实验提供了一定的理论基础。（2）体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞用青蒿琥酯作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中CASK和Id1蛋白表达出现变化,CASK可能作为Id1的上游信号分子,参与成纤维细胞的增殖调控。（3）青蒿琥酯具有剂量和时间依赖性地抑制成纤维细胞的增殖,促进成纤维细胞凋亡,其作用原理与影响成纤维细胞中CASK和Id1的表达有关,即上调了CASK表达,下调了Id1的表达。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 人瘢痕疙瘩组织中CASK 和Id1 表达的研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 瘢痕疙瘩成纤维细胞中CASK，Id1 表达及青蒿琥酯对其表达的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文