海洋微生物产抑菌物质发酵条件及理化性质研究

论文摘要

海洋微生物由于其特殊的生存环境,往往能产生结构新颖、功能多样的活性物质,海洋微生物作为活性物质的新来源,正日益受到人们的关注。本论文主要以落大潮期间在大连黑石礁海区采集的海泥、海水、海藻等作为样品。从中筛选分离得到具有较佳抑菌活性的海洋细菌B-42和海洋霉菌F-04为研究对象。对其生长特性,发酵产抑菌物质培养条件及菌株产生的抑菌物质部分理化性质进行了研究,同时对菌株进行初步鉴定。论文采用杯碟法,确定了海洋细菌B-42和海洋霉菌F-04产抑菌物质的较佳培养条件,对金黄色葡萄球菌：较佳发酵培养基为：葡萄糖1.5%,蛋白胨0.1%,酵母膏0.15%,海水60%和（60%马铃薯海水浸出液）100%,葡萄糖0.5%,蛋白胨0.8%,酵母膏0.2%,摇床转速为140r/min、100r/min,培养温度为24℃、26℃；对大肠埃希氏菌：葡萄糖1%,蛋白胨0.2%,酵母膏0.15%,海水40%和（60%马铃薯海水浸出液）100%,葡萄糖1.5%,蛋白胨0.6%,酵母膏0.1%,摇床转速160r/min、120r/min,培养温度26℃、24℃。论文研究了海洋细菌B-42和海洋霉菌F-04产抑菌物质的部分理化性质,在80℃60min水域条件下,两菌株热稳定性仍较好；在pH6-10范围内,两菌株抑菌物质比较稳定；有机溶剂萃取抑菌活性物质,乙酸乙酯效果最佳。论文通过测定菌株的生物量,确定了两菌株的生长特性,海洋细菌B-42在NaCl浓度3%-4%,培养基初始pH7-8,生长较好；海洋霉菌F-04在较低NaCl浓度,培养基初始pH7-8,生长较好。同时对2株菌株的培养特征、细胞形态及生理生化特性进行了研究,初步鉴定海洋细菌B-42为芽孢杆菌属,海洋霉菌为棒曲霉群。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 海洋微生物资源
• 1.1.1 海洋微生物独特的生存环境
• 1.1.2 海洋微生物的生物多样性
• 1.2 海洋微生物生物活性物质
• 1.2.1 海洋细菌产生的生物活性物质
• 1.2.2 海洋放线菌产生的生物活性物质
• 1.2.3 海洋微藻产生的生物活性物质
• 1.2.4 海洋真菌产生的生物活性物质
• 1.2.5 其他
• 1.3 海洋微生物—开发海洋药物的重要资源
• 1.4 海洋微生物的开发和应用
• 1.4.1 海洋微生物的开发前景
• 1.4.2 海洋微生物抑菌活性物质的研究现状
• 1.4.3 海洋微生物抑菌活性物质的开发和应用
• 1.4.4 技术与方法的研究进展
• 1.4.5 海洋微生物抑菌活性物质的研究价值
• 1.4.6 海洋微生物的展望
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料、主要药品及设备
• 2.1.1 材料
• 2.1.1.1 实验菌株
• 2.1.1.2 指示菌
• 2.1.1.3 培养基
• 2.1.2 主要药品
• 2.1.3 主要仪器及设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 海洋微生物抑菌活性菌株的检测方法
• 2.2.1.1 指示菌培养
• 2.2.1.2 待测菌培养
• 2.2.1.3 抑菌活性检测—管碟法
• 2.2.2 海洋微生物抑菌活性检测方法的选择
• 2.2.2.1 指示菌浓度的确定
• 2.2.2.2 抑菌物质添加量的确定
• 2.2.3 海洋微生物产抑菌物质遗传稳定性
• 2.2.4 培养基组分优化实验
• 2.2.5 海洋微生物生长特性研究
• 2.2.5.1 NaCl浓度对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响（测生物量）
• 2.2.5.2 培养基的初始pH值对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响（测生物量）
• 2.2.6 淡水培养基对海洋微生物生长及代谢的影响
• 2.2.7 海水培养基对海洋微生物生长及代谢的影响
• 2.2.8 培养温度对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响
• 2.2.9 摇床转速对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响
• 2.2.10 抑菌活性物质热稳定性实验
• 2.2.11 抑菌活性物质pH稳定实验
• 2.2.12 抑菌物质的溶解性实验（测抑菌活性）
• 2.2.13 海洋霉菌F-04的初步鉴定
• 2.2.14 海洋细菌B-42菌株的初步鉴定
• 2.2.15 海洋微生物抑菌活性MIC的测定
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 指示菌培养液浓度的确定
• 3.1.1 实验结果
• 3.1.2 结果分析
• 3.2 抑菌物质添加量的确定
• 3.2.1 实验结果
• 3.2.2 结果分析
• 3.3 海洋微生物产抑菌物质遗传稳定性
• 3.3.1 实验结果
• 3.3.2 结果分析
• 3.4 培养基配方各组分优化
• 3.4.1 B-42菌株培养基优化
• 3.4.2 F-04菌株培养基优化
• 3.5 海洋微生物生长特性研究
• 3.5.1 NaCl浓度对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响（测生物量）
• 3.5.1.1 实验结果
• 3.5.1.2 结果分析
• 3.5.2 培养基的初始pH值对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响（测生物量）
• 3.5.2.1 实验结果
• 3.5.2.2 结果分析
• 3.5.3 淡水培养基对海洋微生物生长及代谢的影响
• 3.5.3.1 实验结果
• 3.5.3.2 结果分析
• 3.5.4 海水培养基对海洋微生物生长及代谢的影响
• 3.5.4.1 实验结果
• 3.5.4.2 结果分析
• 3.6 培养温度对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响
• 3.6.1 实验结果
• 3.6.2 结果分析
• 3.7 转速对海洋微生物生长及产抑菌物质的影响
• 3.7.1 实验结果
• 3.7.2 结果分析
• 3.8 海洋微生物产抑菌物质部分理化性质
• 3.8.1 热稳定性
• 3.8.2 pH稳定性
• 3.8.3 抑菌物质的溶解性
• 3.8.3.1 pH沉降法分离抑菌活性物质
• 3.8.3.2 有机溶剂萃取抑菌活性物质
• 3.9 海洋霉菌F-04的初步鉴定
• 3.9.1 三点培养
• 3.9.2 形态观察
• 3.10 海洋细菌B-42菌株的初步鉴定
• 3.10.1 单细胞形态特征
• 3.10.2 菌落形态特征
• 3.10.3 菌株部分生理生化特性
• 3.11 海洋微生物抑菌活性MIC的测定
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢