论文摘要
罗汉果（Siraitia grosvenorii （Swingle） C.Jeffrey）是中国特产植物,属葫芦科（Cucurbitaceae）罗汉果属（Siraitia）。罗汉果经济价值极高,具有广阔的市场前景。当前,罗汉果栽培品种存在着退化,品种单一、混杂等问题,某些品种甚至面临绝种的危险。广西野生罗汉果资源极为丰富,为栽培种的选育提供了完备的基因库。SSR分子标记具有共显性、多态信息含量高、稳定可靠、重复性好等优点,是一种进行遗传多样分析更为理想的分子标记。但对SSR位点的扩增要首先知道SSR两端序列,本研究的目的就是开发罗汉果SSR扩增引物,为罗汉果遗传多样性的研究开辟一种SSR分子标记,进而为罗汉果种质资源的保护、开发利用、品种选育及生境的保护提供遗传资料和科学依据,也为罗汉果其他遗传方面的研究提供参考。本研究用生物素标记的微卫星探针（AC）15、（AT）15、（CT）12、（ATC）10、（CCA）10与连有SuperSNX接头的Rsal酶切罗汉果基因组DNA片段进行杂交,再用链亲和素包被的磁珠吸附杂交产物,富集含有SSR的片段,通过克隆测序得到含有SSR的序列,根据SSR两端序列用Primer Premier 5.0设计引物,用6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测所设计引物扩增效果,筛选出多态性高且扩增条带清晰的引物,获得15对罗汉果微卫星引物。用CERVUS 2.0和GenAlEx 6.3两个软件分析所开发的15对引物在98份供试的罗汉果样品（74份栽培种和24份野生种）中的多态性情况。15个微卫星位点共检测到111个等位基因,平均每个位点为7.4个等位基因,Sg2、Sg11两个位点的等位基因数较少,分别为2个、3个,Sg4位点最多,达12个。15个微卫星位点共检测检测到的平均多态信息含量（PIC）为0.716,Sg2位点的多态信息含量（PIC）最低,为0.543,Sg21位点最高,达到了0.861。15个SSR位点在罗汉果栽培品种青皮果、红毛果、爆棚籽、冬瓜汉、茶山果及雄株的等位基因数分别为38、31、24、48、46、50,多态信息含量（PIC）分别为0.266、0.197、0.201、0.419、0.396、0.411。说明栽培种青皮果、红毛果、爆棚籽的遗传多样性水平很低,冬瓜汉、茶山果及雄株的遗传多样性相对较高。单株聚类分析同样也表明了栽培品种之间的遗传分化关系,另外还表明品种之间存在着单一、混杂的问题。而野生种金秀居群在15个SSR位点的等为基因数和PIC值分别为98和0.611,说明金秀居群的遗传多样性水平远比栽培种的高。经Hardy-weinbery检验,野生种金秀居群在Sg4和Sg17两个位点极显著偏离Hardy-weinbery平衡（P<0.001）。本研究结果表明,磁珠富集法所开发的15对微卫星引物在罗汉果基因组DNA中得到了很好的扩增,不但多态性高而且还清晰地区分出了纯合子和杂合子,达到了预期的扩增结果,可以进一步用于罗汉果的遗传研究。