香鳞毛蕨抑制类风湿性关节炎活性成分的研究

论文摘要

香鳞毛蕨（Dryopteris fragrans（L.）schott）是落叶多年生草本,属于鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物,生长于高寒地区的滑石坡、森林中的碎石坡和火山周围的岩浆缝隙中。我国的东北、华北,俄罗斯日本以及欧美均有分布。另据五大连池地方志记载,达斡尔族居民在几百年前就已经使用香鳞毛蕨水煎液治疗多种疾病,其无毒副作用体现了中药的独特优势。链球菌（Streptococcus）是化脓性球菌,属于芽孢杆菌纲,乳杆菌目,链球菌科,广泛分布于自然界中。乙型溶血性链球菌（β-Hemolytic streptococcus）是链球菌中致病性较强的一种细菌,可引起多种疾病。大量实验研究和临床测试证明乙型溶血性链球菌与类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的发病存在密切关系。近年来对香鳞毛蕨化学成分及其治疗各种疾病的研究比较广泛,关于银屑病、类风湿性关节炎的治疗均有所报道,但对其中小极性的活性成分研究较少。本文对香鳞毛蕨乙醇浸膏进行乙酸乙酯/水萃取,并对得到的乙酸乙酯组分和水组分进行了乙型溶血性链球菌的抑菌谱测定,以吲哚美辛为阳性对照,结果表明:乙酸乙酯组分的最小抑菌浓度为15.625mg/mL.水组分的最小抑菌浓度为62.500mg/mL,乙酸乙酯组分与吲哚美辛组无显著性差异,乙酸乙酯组分与水组分间存在显著性差异。为了确定香鳞毛蕨抑制由乙型溶血性链球菌引起的类风湿性关节炎的有效化学成分,本文运用光镜技术和免疫组织化学等方法考察了乙酸乙酯组分和水组分对IL-17、TNF及滑膜组织的影响,结果表明:乙酸乙酯高剂量组、吲哚美辛组对类风湿性关 节炎的治疗疗效最佳。最后确定香鳞毛蕨乙酸乙酯组分为主要活性部位,并对其进行了化学成分分离。本文通过正相硅胶柱层析、反相（MCI、ODS、RP-18）柱层析、Sephadex LH-20柱层析等技术分离、纯化,得到化合物23个。经UV、IR、MS、NMR及各种理化常数的测定,最后鉴定了其中15个化合物的结构。包括倍半萜类化合物3个、香豆素类化合物1个、间苯三酚衍生物7个、谷甾醇1个、木脂素类3个。其中新化合物 2 个,命名 2,3-Dihydroxy-1,3,5-cadinatrien-10-Methylformate,8-hydroxyl-4-isopropyl-7-methoxy-6-methyl-2H-benzopyran-2-one。已知化合物中桉烷型倍半萜、（+）3-（3’,4’-二甲氧基）-4-（3"’,4"’-二甲氧基苯乙烯基）环己烯、（-）3-（3’,4’-二甲氧基）-4-（3"’,4"’,-二甲氧基苯乙烯基）环己烯和4,4’-二羟基-3,3’-二甲氧基-7,9’:7’,9-二环氧木脂素共4个化合物首次于鳞毛蕨属植物中发现;通过对所得5个化合物的抗炎筛选试验,确定了2’,6’-二羟基-4’-甲氧基-3’-甲基苯丙酮和2’,6’-二羟基-4’-甲氧基-3’-甲基苯丁酮具有抗炎活性。本文对香鳞毛蕨抗链球菌活性成分进行了研究,并对得到的单体化合物进行了抗炎活性筛选,最终得到了有活性的先导化合物,为今后深入研究由链球菌引起的类风湿性关节炎的治疗提供了新的药用资源。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1.1 鳞毛蕨属植物的研究进展
• 1.1.1 化学成分研究
• 1.1.2 鳞毛蕨属植物药理作用研究
• 1.2 香鳞毛蕨的研究进展
• 1.2.1 生药学研究
• 1.2.2 化学成分研究
• 1.2.3 药理作用研究
• 1.3 链球菌和类风湿性关节炎
• 1.3.1 链球菌概述
• 1.3.2 类风湿性关节炎的发病机制
• 1.3.3 类风湿性关节炎的治疗
• 1.4 本研究的目的和意义
• 第2章 香鳞毛蕨粗提物的药理活性研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验样品
• 2.1.2 菌种
• 2.1.3 培养基的配制
• 2.1.4 动物
• 2.1.5 试剂
• 2.2 试验仪器
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 供试样品的提取和制备
• 2.3.2 菌种的活化和制备
• 2.3.3 抑菌圈的测定
• 2.3.4 小鼠建模方法
• 2.3.5 对小鼠的临床观察
• 2.3.6 组织形态学观察
• 2.3.7 血清细胞因子的测定
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 香鳞毛蕨粗提物的抑菌活性筛选结果
• 2.4.2 小鼠的临床观察结果
• 2.4.3 组织形态学观察结果
• 2.4.4 血清细胞因子的测定结果
• 2.5 本章小结
• 第3章 香鳞毛蕨有效组分的分离鉴定
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验仪器与材料
• 3.1.2 试验样品
• 3.1.3 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 乙酸乙酯组分化学成分分离结果
• 3.2.2 化合物的结构鉴定
• 3.2.3 化合物的理化常数和波谱数据
• 3.3 本章小结
• 第4章 香鳞毛蕨单体化合物生物活性研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.3 本章小结
• 第5章 结论
• 第6章 创新点
• 参考文献
• 附录1
• 附录2
• 附录3
• 致谢