吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的质量控制方法及其药物代谢动力学研究

论文摘要

吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯是5-氟尿嘧啶的前体药物，它可以通过酸碱催化水解或在胃肠道生物酶的作用下释放出5-氟尿嘧啶。本文建立了吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯含量测定和有关物质的检查方法，并应用已建立的方法进行稳定性研究；通过对吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯水解动力学的研究，阐明了其在水溶液及生物酶中的水解特征；建立了高效液相色谱法测定大鼠组织及排泄物中吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的代谢物5-氟尿嘧啶含量的方法，并研究其在大鼠体内的分布和排泄特征。1．吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯含量测定方法研究建立了紫外分光光度法和高效液相色谱法分别对吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯进行含量测定。紫外分光光度法在8．0～18μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好（r=0．9999），平均回收率为99．4％（RSD=0．8％，n=9）。高效液相色谱法采用DiamonsilTMC18（250mm×4．6 mm，5μm）柱，流动相为甲醇-0．025mol·L-1醋酸铵（65：35，v／v）（冰醋酸调pH至3．5），流速为1．0 mL·min-1。检测波长260nm。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的质量浓度在5．0～50μg·mL-1的范围内，峰面积与浓度线性关系良好（r=0．9999），平均回收率为99．7％（RSD=1．0％，n=9）。2种方法均适用于吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的含量测定，且都有较好的准确度和精密度。紫外分光光度法快速、操作简便；HPLC法专属性好，可测定主药含量，同时还可以进行杂质检查。2．吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的有关物质检查采用高效液相色谱法进行有关物质的检查。色谱柱为DiamonsilTMC18（250 mm×4．6 mm，5μm）；流动相为甲醇-0．025 mol·L-1醋酸铵（65：35，v／v）（用冰醋酸调节pH至3．5）流速：1．0 mL·min-1；检测波长：260 nm；柱温：40℃。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯与其有关物质、降解产物能够得到良好的分离。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的检测限为2．0 ng·mL-1。3．吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的稳定性研究参照新药稳定性研究的指导原则，应用已建立的HPLC含量测定法及HPLC有关物质检查法，进行了影响因素试验、加速试验及长期稳定性试验。影响因素试验结果表明光照、高温和高湿条件对吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的稳定性均有影响；加速试验和长期试验结果表明吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯原料在贮存条件下基本稳定，符合《中华人民共和国药典（2005年版）》和新药研究指导原则中对原料药稳定性的要求。4．吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的水解动力学研究建立HPLC法研究吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯在不同pH值的缓冲溶液、80％血浆、20％肝匀浆及胃肠道生物酶中的水解动力学。方法的线性关系和重复性良好。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯和5-氟尿嘧啶的定量下限分别为100ng·mL-1和20 ng·mL-1。日内和日间精密度RSD值均小于13．5％。准确度（RE）在±7．5％之间。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯在37℃pH值为1．38～10．52的缓冲溶液中水解，半衰期在1．18～7．09 h之间。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯具有酸碱催化的伪一级降解动力学特征。吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯在80％的血浆和20％肝匀浆中降解得很快，半衰期分别为0．819 min和7．584min。由胃肠道内容物的水解结果可知，吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯主要在小肠和结肠中释放出5-氟尿嘧啶。5．吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的代谢物5-氟尿嘧啶在大鼠体内的分布和排泄进行研究建立了高效液相色谱-紫外检测法测定吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的代谢物5-氟尿嘧啶在大鼠各组织和排泄物中的含量。生物样品经液-液萃取后，以甲醇-水-36％乙酸（3：96．9：0．1，v／v）或甲醇-水-36％乙酸（10：89．9：0．1，v／v）为流动相，使用DiamonsilTMC18色谱柱进行分离，检测波长为260 nm。大鼠ig100 mg·kg-1IFM后，5-氟尿嘧啶在胃、小肠、肝组织中浓度较高，其它组织和血浆中较低。5-氟尿嘧啶从尿液（0～24 h）、粪便（0～48 h）中排泄量分别占给药总量的0．0065％和0．063％。该方法准确、专属性强，适用于IFM代谢物5-氟尿嘧啶的临床前药代动力学研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 肿瘤药物治疗发展
• 1.2 氟尿嘧啶类抗癌药物的发展
• 1.3 前体药物
• 1.4 药物代谢研究与新药开发
• 1.5 立题依据和主要研究内容
• 第二章 吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯含量测定方法研究
• 2.1 药品、仪器与试剂
• 2.2 紫外分光光度法
• 2.2.1 测定波长的选择
• 2.2.2 线性关系试验
• 2.2.3 百分吸收系数的测定
• 2.2.4 精密度试验
• 2.2.5 样品溶液的稳定性
• 2.2.6 回收率试验
• 2.2.7 样品含量测定
• 2.3 高效液相色谱法
• 2.3.1 对照品溶液的制备
• 2.3.2 供试品溶液的制备
• 2.3.3 色谱条件
• 2.3.4 系统适用性试验
• 2.3.5 专属性实验
• 2.3.6 标准曲线与线性范围
• 2.3.7 检测限及定量限
• 2.3.8 精密度试验
• 2.3.9 回收率试验
• 2.3.10 供试品溶液的稳定性
• 2.3.11 样品含量测定
• 2.4 讨论
• 2.4.1 紫外分光光度法
• 2.4.2 高效液相色谱法
• 2.4.3 2种方法测定结果的比较
• 第三章 吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的有关物质检查方法的研究
• 3.1 药品、仪器与试剂
• 3.2 有关物质检查方法研究
• 3.2.1 色谱条件
• 3.2.2 系统适用性试验
• 3.2.3 降解产物的分离
• 3.2.4 系统耐用性试验
• 3.2.5 样品溶液的稳定性
• 3.2.6 检测限
• 3.2.7 有关物质检查法
• 第四章 吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的稳定性研究
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法与结果
• 4.2.1 考察项目
• 4.2.2 影响因素试验
• 4.2.3 加速试验
• 4.2.4 长期试验
• 4.3 讨论
• 第五章 吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的体外水解动力学研究
• 5.1 药品、仪器与试剂
• 5.2 IFM在不同pH缓冲溶液中的水解动力学
• 5.2.1 溶液的配制
• 5.2.2 不同pH值缓冲溶液的配制
• 5.2.3 色谱条件
• 5.2.4 标准曲线的制备
• 5.2.5 精密度和准确度
• 5.2.6 回收率试验
• 5.2.7 实验方法
• 5.2.8 实验结果
• 5.2.9 讨论
• 5.3 IFM在大鼠胃肠道内容物、80%血浆、20%肝匀浆中的水解动力学研究
• 5.3.1 溶液的配制
• 5.3.2 色谱条件
• 5.3.3 生物样品的处理方法
• 5.3.4 分析方法确证
• 5.3.5 实验方法
• 5.3.6 实验结果
• 5.3.7 讨论
• 第六章 吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的代谢物5-氟尿嘧啶在大鼠体内的组织分布和排泄研究
• 6.1 药品、仪器与试剂
• 6.2 分析方法的建立
• 6.2.1 溶液配制
• 6.2.2 色谱条件
• 6.2.3 生物样品处理
• 6.2.4 分析方法确证
• 6.3 大鼠组织分布和排泄实验
• 6.3.1 实验动物
• 6.3.2 受试药物的配制
• 6.3.3 组织分布试验
• 6.3.4 排泄试验
• 6.3.5 数据分析
• 6.4 实验结果
• 6.4.1 组织分布
• 6.4.2 尿和粪排泄
• 6.5 讨论
• 第七章 结论
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢