Caspase-3抑制剂对小鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

论文摘要

[目的]探讨caspase-3抑制剂（Ac-DEVD-CHO）对肾缺血再灌注损伤的保护作用,并对其可能机制进行初步研究。[方法]采用切除右肾,夹闭左侧肾蒂致左肾缺血,原位再灌注制作小鼠肾缺血再灌注损伤模型。雄性昆明种小鼠30只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、（Ac-DEVD-CHO）治疗组。治疗组在肾脏缺血45分钟后再灌注时经尾静脉给予Ac-DEVD-CHO（4μg/g）（溶于0.3ml含1%DMSO的生理盐水）,缺血再灌注组再灌注时给予0.3ml含1%DMSO的生理盐水,假手术组不夹闭肾蒂,余处理同缺血再灌注组。各组小鼠于再灌注12小时后摘眼球取血检测血肌酐及尿素氮水平;切取左肾标本,用比色法检测肾组织匀浆MPO及caspase-3活性,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化测定肾组织黏附分子-1（ICAM-1）蛋白表达,肾组织HE染色观察肾脏损伤情况。[结果]假手术组肾脏结构基本正常,缺血再灌注组可见明显肾小管上皮细胞变性、坏死、小管管腔扩张,且白细胞浸润明显,而治疗组较缺血再灌注组上述病理变化明显减轻。缺血再灌注组与假手术组比较,血肌酐及尿素氮水平显著升高（P均<0.01）,肾小管上皮细胞凋亡指数显著增高（P<0.01）,caspase-3及MPO活性显著升高（P均<0.01）,ICAM-1蛋白表达明显增强（P<0.01）;治疗组与缺血再灌注组比较,血肌酐及尿素氮值明显下降（P均<0.01）,细胞凋亡指数显著降低（P<0.01）,caspase-3及MPO活性得到抑制（P<0.01,P<0.05）,ICAM-1蛋白表达减弱（P<0.05）;但治疗组同假手术组比较,除caspase-3活性差异无统计学意义外（P>0.05）,其他指标两组间差异仍有统计学意义（P<0.01）。[结论]1.小鼠肾缺血再灌注损伤模型的制作是成功的。缺血再灌注早期就出现明显的肾脏功能和肾脏组织结构的改变。2.再灌注开始时给予Ac-DEVD-CHO能显著减轻小鼠肾缺血再灌注损伤,其保护机制可能是通过抑制caspase-3活性,减少细胞凋亡和抑制ICAM-1蛋白表达及其介导的炎症反应来实现的。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 动物模型的建立
• 1.2.2 动物分组与给药
• 1.2.3 检测项目
• 1.3 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 各组肾组织形态学变化的初步观察及HE染色
• 2.2 肾功能生化指标结果
• 2.3 肾组织细胞凋亡的实验结果
• 2.4 肾组织caspase-3活性的实验结果
• 2.5 肾组织MPO活性的实验结果
• 2.6 肾组织ICAM-1蛋白表达的实验结果
• 第三章 讨论
• 3.1 小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立及可靠性
• 3.2 Ac-DEVD-CHO对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制推测
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间发表的论文
• 英汉缩略词对照表
• 致谢